真核生物染色体のS期に於ける動態の全て―出芽酵母第六染色体をモデルとして

关于真核染色体 S 期动力学的一切 - 以酿酒酵母 6 号染色体为模型

• 批准号: 11239205
• 负责人: 白髭 克彦
• 金额: $ 35.33万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research (2001-2003)Nara Institute of Science and Technology (1999-2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11239205/
• 关键词: 染色体複製; 複製チェックポイント; 複製停止; TOF1; MRC1; DNAチップ; 染色体ダイナミクス; 細胞周期; チェックポイント制御; DNA複製; 複製開始因子; 染色体; 複製開始; ChIP-chip; 複製開始点; 第六染色体; 免疫沈降; DNA-蛋白相互作用; 転写; 減数分裂; ヌクレオソーム; 染色体構築; 時間的制御; マルチレプリコン; 細胞周期チェックポイント; RAD53

複製チェックポイント制御機構が欠損すると、DNA損傷を修復しないまま、あるいは未複製の染色体を持ったまま、細胞は分裂してしまうため、細胞は死滅あるいは、異常染色体を持ったまま増殖を続けることになる。我々は、チェックポイント制御と複製過程の連携を明らかにするためには一本の染色体のレベルで詳細に複製中の染色体の動態を解析しなくてはならないと考え、出芽酵母第六染色体を解析対象とし、六番染色体全体(280kb)を約13000個の25塩基長の単鎖DNAで余すところなくカバーするカスタムDNAチップを作成した。このDNAチップを用い、いくつかのタンパクの結合領域についてChIP-chip法(Chromatin Immuno-precipitationにより得られたDNAをDNAchip上で検出する方法)により解析を行ったところ1解像度300塩基対でタンパクの結合プロファイルを解析可能であった。同時に我々は複製領域をBrdUでラベルし、抗BrdU抗体で免疫沈降することで検出することにも成功した。この方法により、チェックポイント非活性化時、HU(ヒドロキシウレア)添加による複製異常時(チェックポイント活性化時)のチェック因子及び複製因子の配置を解析した。その結果、MRC1、及びTOF1という二つのチェックポイント因子のみは異常の有無に関係なく、複製伸長複合体の一部として機能していることが明らかになった。さらに、MRC1とTOF1、それぞれの因子の欠失酵母を用い、HU添加時の複製領域と複製伸長因子の相対的配置を解析した。その結果、変異株中では複製伸長因子が複製領域より新鎖合成を行うことなく2-3kb先行して停止することが判明した。このことは、複製の停止はチェックポイント活性化を必要とせず、複製伸長複合体に組込まれたチェック因子により誘導されることを示している。

The replication control mechanism is defective, the DNA damage is repaired, the unreplicated chromosome is maintained, the cell is destroyed, the abnormal chromosome is maintained, and the DNA damage is prevented. The analysis of chromosome 6 of budding yeast was carried out for the whole hexachromosome (280kb), about 13000 single-stranded DNA residues of 25 bp in length. The DNA chip is used in the DNA chip preparation, and the DNA chip is used in the DNA chip preparation. The DNA chip is prepared by Chromatin Immuno-precipitation. At the same time, we have successfully cloned BrdU antibodies and anti-BrdU antibodies This method analyzes the allocation of the replication factor and the replication factor when the replication factor is inactive and when the replication factor is active. The results, MRC1, and TOF1 are related to the presence or absence of abnormalities in the replication elongation complex. MRC1 and TOF1, the missing yeast of the replication domain and the corresponding configuration of the replication elongation factor when HU is added The result is that the replication elongation factor in different plants is different from that in the replication domain. The new lock synthesis is different from that in 2-3kb. This is the first time that the replication process has been successfully completed.

项目成果

J. M. Kim, H. Yoshikawa, K. Shirahige: "A member of the YER057c/yjgf/Uk114 family links isoleucine biosynthesis and intact mitochondria"Genes to Cells. 6. 507-517 (2001)

J. M. Kim、H. Yoshikawa、K. Shirahige：“YER057c/yjgf/Uk114 家族的成员将异亮氨酸生物合成和完整线粒体连接起来”基因与细胞。

Kodama Y, Omura F, Takahashi K, Shirahige K, Ashikari T: "Genome-wide expression analysis of genes affected by amino acid sensor Ssy1p in Saccharomyces cerevisiae"Curr Genet.. 41. 63-72 (2002)

Kodama Y、Omura F、Takahashi K、Shirahige K、Ashikari T：“酿酒酵母中受氨基酸传感器 Ssy1p 影响的基因的全基因组表达分析”Curr Genet.. 41. 63-72 (2002)

K.-I. Watanabe, J. Morishita, K. Umezu, K. Shirahige, H. Maki: "Involvement of RAD9-dependent damage checkpoint control in arrest of cell cycle, induction of cell death, and chromosome instability caused by defects in the origin recognition complex in Sac

K.-I。

Radji M,Kim JM,Togan T,Yoshikawa H,and Shirahige K: "The cloning and characterization of the CDC50 gene famliy in Saccharomyces cerevisiae"YEAST. 18. 195-205 (2001)

Radji M、Kim JM、Togan T、Yoshikawa H 和 Shirahige K：“酿酒酵母中 CDC50 基因家族的克隆和表征”酵母。

Tatsumi Y,Tsurimoto T,Shirahige K,Yoshikawa H,and Obuse C: "Association of human origin recognition complex 1 with chromatin DNA"Journal of Biological Chemistry. 275. 5904-5910 (2000)

Tatsumi Y、Tsurimoto T、Shirahige K、Yoshikawa H 和 Obuse C：“人类起源识别复合物 1 与染色质 DNA 的关联”生物化学杂志。