サイトカインによるマスト細胞の機能修飾とその制御についての研究

肥大细胞功能修饰及其细胞因子调控研究

基本信息

批准号：
12139202
负责人：
平澤典保
金额：
$ 18.56万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

マスト細胞の活性化に対するJAK3の関与について、ラットマスト細胞株RBL-2H3細胞を用いて解析した。JAK3阻害薬WHI-P154が抗原刺激によるGab2のリン酸化を抑制してphosphati-dylinositol 3-kinase(PI3-kinase)の活性化を抑制することを明らかにしたが、さらに、JAK3に、より特異的な阻害薬WHI-P131を用いて同様の実験を行った。その結果、WHI-P131もGab2のリン酸化とPI3-kinaseの活性化を抑制すること、脱顆粒反応及び各種MAP kinase(P44/42 MAP kinase、p38 MAP kinase及びc-Jun N-terminal kinase)のリン酸化を抑制することが明らかになった。さらにマスト細胞の活性化におけるJAK3の関与を明確にするために、JAK3欠損マウスから骨髄由来マスト細胞(BMMC)を調製した。JAK3欠損マウスから調製したBMMCに、おけるLyn、Syk及びFynの発現量はwild-typeマウスから調製したBMMCと差は認められなかった。このJAK3を発現していないBMMCとJAK3を発現しているBMMCにおいて、抗原刺激により誘発される脱顆粒反応、MAP kinaseの活性化について比較したところ、いずれの反応もJAK3欠損マウスから調製したBMCにおいて減弱することはなかった。また、WHI-P131はJAK3欠損マウス由来のBMMCにおける抗原刺激による脱顆粒反応及びp44/42MAP kinaseのリン酸化をwild-type BMMCの反応と同様に抑制した。したがって、JAK3は抗原刺激によるマスト細胞の活性化にはほとんど関与していないこと、WHI-P131及びWHI-P154はJAK3以外の作用点を持つことが示唆された。これらの薬物の標的分子を同定することは新しい抗アレルギー薬開発のための標的分子の同定に寄与すると考えられる。

使用大鼠肥大细胞系RBL-2H3细胞分析JAK3参与肥大细胞活化。据表明，JAK3抑制剂WHI-P154通过抗原刺激并抑制磷酸二甲甲醇3-激酶（PI3-激酶）的激活来抑制GAB2的磷酸化，但是此外，使用更具体的抑制剂WHI-P131进行了类似的实验。结果，据表明，WHI-P131还抑制了GAB2的磷酸化和PI3-激酶的激活，以及各种MAP激酶的脱粒反应和磷酸化（p44/42 MAP激酶，p38 MAP MAP激酶和C-Jun N-Term-Term-Term-Term-Termalnalinalasinalase）。为了进一步阐明JAK3参与肥大细胞活化，从JAK3缺陷型小鼠中制备了骨髓来源的肥大细胞（BMMC）。由JAK3缺陷型小鼠制备的BMMC中LYN，SYK和FYN的表达水平与野生型小鼠制备的小鼠的表达水平没有差异。当比较抗原刺激诱导的脱粒反应和MAP激酶在不表达JAK3和表达JAK3的BMMC中的MAP激酶激活时，在从JAK3缺陷型小鼠中制备的BMC中都不会减弱反应。此外，WHI-P131在BMMC中以与野生型BMMC相同的方式抑制了BMMC中p44/42map激酶的抗原刺激的脱粒和磷酸化。因此，有人提出JAK3几乎不参与抗原刺激激活肥大细胞，而WHI-P131和WHI-P154除JAK3以外的作用点。鉴定这些药物的靶标分子被认为有助于鉴定出新的抗过敏药物的靶标分子。