転写とヌクレオチド除去修復機構を共役する新規蛋白質複合体の解析

分析耦合转录和核苷酸切除修复机制的新型蛋白质复合物

• 批准号: 12143203
• 负责人: 田中 亀代次
• 金额: $ 40.32万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12143203/
• 关键词: ヌクレオチド除去修復; 転写と共役した修復; コケイン症候群; 紫外線高感受性症候群; ユビキンチンリガーゼ; siRNA; ノックアウトマウス; 微小核融合法; DNA損傷; DNA修復; 転写; スプライシング; RNAポリメラーゼII; ユビキチン; WD40リピート; 色素性乾皮症; ダブルノックアウトマウス; 核マトリクス; 小脳失調; 蛋白質複合体; 小脳発育; アポトーシス; 遺伝子ターゲティング; ミスマッチ修復; GTPase; 核移行

転写と共役した修復(TCR)に関与するコケイン症候群A群(CSA)蛋白質は、DDB1、COP9 signalosome、Roc1、Cullin4Aと複合体を構成し、ユビキチン・リガーゼ(E3)活性を持つことを確認した。さらに、CSA蛋白質複合体は、紫外線照射した細胞ではRNA polymerase IIoとも結合した。他方、CS-A患者由来の変異CSA蛋白質では複合体の形成が起こらないこと、E3活性もないことを明らかにし、CSA複合体によるユビキチン化制御がTCR機構に関与することを強く示唆した。CSA蛋白質複合体に含まれるDDB1の役割を解明するため、DDB1遺伝子をコンデイショナルにノックアウトしたマウスの作成を行った。他方、転写およびTCRに関与するXAB2蛋白質複合体を精製し、6種類の構成因子からなることを明らかにした。siRNAでXAB2をノックダウンした細胞は、TCR能が低下し、紫外線高感受性となり、mRNAスプライシングにも異常を示した。XAB2が、TCR、転写、スプライシングに関与する多機能性蛋白質複合体の連結因子であることを示唆した。XAB2遺伝子をノックアウトしたマウスを作成し、ホモ接合体マウスは胚盤胞時期までに胎児致死となることを明らかにした。他方、TCRに異常をもつが、CSと異なり神経症状や早期老化徴候は示さず、軽微な皮膚症状のみを示すUV^s症候群の原因遺伝子座が10番染色体に存在することを明らかにした。さらに、このUV^s症候群が、10番染色体に座位するコケイン症候群B群(CSB)遺伝子のヌル突然変異によって発症していることを発見した。CSB遺伝子にヌル突然変異を持つにもかかわらず、この患者が何故CS徴候を示さないのかが疑問として残った。CS症候を強く示すCSB患者は短縮CSB蛋白質が生成されており、短縮CSB蛋白質が何らかの異常な機能を発揮しており、そのととがCS徴候の発症に関連している可能性を指摘した。

Planning write と total service し た repair (TCR) に masato and す る コ ケ イ ン syndrome group A (CSA) protein は, DDB1, COP9 signalosome, Roc1, Cullin4A と complex を し, ユ ビ キ チ ン · リ ガ ー ゼ (E3) activity を hold つ こ と を confirm し た. Youdaoplaceholder0, CSA protein complex た, ultraviolet irradiation of た た RNA polymerase IIoと さらに binding to た た. Fang, CS - A patient origin の - different CSA protein で は complex の formation が こ ら な い こ と, E3 activity も な い こ と を Ming ら か に し, CSA complex に よ る ユ ビ キ チ ン the suppression が TCR institutions に masato and す る こ と を く and shown strong sucking し た. CSA protein complex contains に ま れ る DDB1 cut を の service interpret す る た め, DDB1 but 伝 を コ ン デ イ シ ョ ナ ル に ノ ッ ク ア ウ ト し た マ ウ ス の made を line っ た. Other party, planning to write お よ び TCR に masato and す る XAB2 protein complex を refined し, 6 species の constitute factor か ら な る こ と を Ming ら か に し た. SiRNA で XAB2 を ノ ッ ク ダ ウ ン し は た cells, low TCR can が し, high uv sensitivity と な り, mRNA ス プ ラ イ シ ン グ に も abnormal を shown し た. XAB2 が, TCR, planning to write, ス プ ラ イ シ ン グ に masato and す る more functional protein complex の connecting factor で あ る こ と を in stopping し た. XAB2 posthumous son 伝 を ノ ッ ク ア ウ ト し た マ ウ ス を し, consummate ホ モ gametes マ ウ ス は blastoderm cell period ま で に tire where death と な る こ と を Ming ら か に し た. Other party, which is the abnormal に を も つ が, CS と different な り god 経 symptoms early aging 徴 や signs は shown さ ず, 軽 な skin symptoms の み を す UV の reason ^ s syndrome in heritage 伝 stroma が exist 10 times chromosome に す る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に, こ の UV が ^ s syndrome, 10 were chromosome に seat す る コ ケ イ ン syndrome group B (the CSB) posthumous son 伝 の ヌ ル suddenly - different に よ っ て 発 disease し て い る こ と を 発 see し た. The CSB posthumous son 伝 に ヌ ル suddenly - different を hold つ に も か か わ ら ず, こ の syndrome patients が why CS 徴 を shown さ な い の か が doubt と し て residual っ た. CS symptoms を strong く す indicated the CSB patients は shortening the CSB protein が generated さ れ て お り, shortening the CSB protein が what ら か の abnormal function of な を 発 swing し て お り, そ の と と が CS 徴 hou の 発 disease に masato even し て い る possibility を blame し た.

项目成果

Regina Groisman: "The ubiquitin ligase activity in the DDB2 and CSA complexes is differentially regulated by the COP9 signalosome in response to DNA damage."Cell. 113. 357-367 (2003)

Regina Groisman：“DDB2 和 CSA 复合物中的泛素连接酶活性受到 COP9 信号体的差异调节，以响应 DNA 损伤。”细胞。

Hiroko Miyauchi-Hashimoto: "Carcinogen-induced inflammation and immunosuppression are enhanced in xeroderma pigmentosum group A (XPA) model mice associated with hyperproduction of prostaglandin E2"The Journal of Immunology. 166. 5782-5791 (2001)

Hiroko Miyauchi-Hashimoto：“致癌物诱导的炎症和免疫抑制在 A 组色素性干皮病 (XPA) 模型小鼠中增强，与前列腺素 E2 的过度产生有关”《免疫学杂志》。

Yoshimichi Nakatsu: "XAB2, a novel tetratricopeptide repeat protein, involved in transcription-coupled DNA repair and transcription"J.Biol.Chem.. 275. 34931-34937 (2000)

Yoshimichi Nakatsu：“XAB2，一种新型四肽重复蛋白，参与转录偶联的 DNA 修复和转录”J.Biol.Chem.. 275. 34931-34937 (2000)

Shinya Kamiuchi: "Translocation of Cockayne syndrome group A protein to the nuclear matrix : possible relevance to transcription-coupled DNA repair"Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 99. 201-206 (2002)

Shinya Kamiuchi：“科凯恩综合征 A 组蛋白易位至核基质：可能与转录偶联 DNA 修复相关”Proc。

Inhibition of nucleotide excision repair by anti-XPA monoclonal antibodies which interfere with binding to RPA, ERCC1 and TFIIH.

抗 XPA 单克隆抗体抑制核苷酸切除修复，干扰与 RPA、ERCC1 和 TFIIH 的结合。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications 321
• 作者: Masafumi Saijo.;Toshiro Matsuda.;Isao Kuraoka;Kiyoii Tanaka.
• 通讯作者: Kiyoii Tanaka.