DNAトランスフェクション法による色素性乾皮症A群の遺伝子クローニング

DNA转染法克隆着色性干皮病A组基因

• 批准号: 63015049
• 负责人: 田中 亀代次
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63015049/
• 关键词: DNAクローニング; 色素性乾皮症; 高発癌性遺伝疾患; DNA修復; DNAトランスフェクション; pSV_2gpt; Okayama-BergcDNAライブラリー

色素性乾皮症(XP)A群の遺伝子クローニングをDNAトランスフェクション法により行った。A群XP細胞はDNA修復能に異常をもち、紫外線(UV)に高感受性を示す。このA群XP細胞に、リン酸カルシウム共沈法によりマウスゲノムDNAをトランスフェクションし、マウスDNA修復遺伝子を取り込み、UV抵抗性を獲得したXP細胞を得た。さらにこのUV抵抗性XPトランスフェクタントに含まれるマウスDNA修復遺伝子を、マウス繰り返し配列をプローブにして、EMBL3ファージベクターにクローニングした。このクローニングした遺伝子は、他の2つの別家系のA群XPのDNA修復能も回復させることができたが、B、C、D、F、G群XPには無効でありA群特異的遺伝子であった。ついで、この遺伝子によってコードされるmRNAを、クローニングされた遺伝子の一部をプローブにしたノザンハイブリダイゼーションで調べた。供与体マウス細胞とUV抵抗性XPトランスフェクタントには約1KbのmRNAが、正常ヒト細胞では1.3Kbと1KbのmRNAが認められた。一方、異なる3家系のA群XP細胞には、これらのいずれのmRNAも認められなかった。これらのマウス及びヒトmRNAに対応するcDNAを、pcD_2Okayama-BcrgcDNAライブラリーよりクローニングした。A群XP細胞のDNA修復能を回復させ得る完全長cDNAクローンは、マウス、ヒトともに、約200万個に1個の割合でとれ、そのサイズは、マウス1Kb、ヒト1.4Kbであった。ヒトcDNAをプローブにして、A群XP細胞のゲノムDNA及びmRNAを調べた。サザンブロッティングでは、10家系のA群XPと正常者間に相異は認められなかったがサザンブロッティングでは、いずれのA群XPでも、1.4Kbと1KbのmRNAは欠損していた。B、C、D、F、G群XPでは正常者と変わらず、2つのmRNAが認められた。

Xeroderma pigmentosum (XP) Group A の伝子クローニングをDNA トランスフェクション法により行った. Group A XP cells show abnormal DNA repair ability and high ultraviolet (UV) sensitivity.このA groupクションし, マウスDNA repair legacy 伝子をtake り込み, UV resistance をget したXP cells をget た.さらにこのUV resistanceマウス缲り回し is paired with をプローブにして and EMBL3 ファージベクターにクローニングした.このクローニングした伝子は、his の2つのdifferent family のA groupることができたが, B, C, D, F, G group XP には invalid であり A group-specific leftover であった.ついで、この伝子によってコードされるmRNAを、クローニングされた伝子の一一をプローブにしたノザンハイブリダイゼーションで调べた. Donor donor cells contain UV-resistant XP stem cells with approximately 1Kb of mRNA, and normal stem cells contain 1.3Kb and contain 1Kb of mRNA. One side, heterogeneous 3 family group A XP cell には, これらのいずれのmRNAも recognized められなかった.これらのマウス和びヒトmRNAに対応するcDNAを、pcD_2Okayama-BcrgcDNAライブラリーよりクローニングした. The DNA repair ability of group A XP cells can be restored to full-length cDNA, including クローンは, マウス, and ヒトともに, about 2 million に1 pieces of でとれ, そのサイズは, マウス1Kb, ヒト1.4Kb であった.ヒトcDNA をプローブにして, Group A XP cells のゲノムDNA and びmRNA をtuned べた.サザンブロッティングでは, 10 family A groupブロッティングでは、いずれのA group Groups B, C, D, F, and G have normal XP and 2 mRNA.