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DNAトランスフェクション法による色素性乾皮症A群の遺伝子クローニング

DNA转染法克隆着色性干皮病A组基因

基本信息

批准号：
63015049
负责人：
田中亀代次
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

色素性乾皮症(XP)A群の遺伝子クローニングをDNAトランスフェクション法により行った。A群XP細胞はDNA修復能に異常をもち、紫外線(UV)に高感受性を示す。このA群XP細胞に、リン酸カルシウム共沈法によりマウスゲノムDNAをトランスフェクションし、マウスDNA修復遺伝子を取り込み、UV抵抗性を獲得したXP細胞を得た。さらにこのUV抵抗性XPトランスフェクタントに含まれるマウスDNA修復遺伝子を、マウス繰り返し配列をプローブにして、EMBL3ファージベクターにクローニングした。このクローニングした遺伝子は、他の2つの別家系のA群XPのDNA修復能も回復させることができたが、B、C、D、F、G群XPには無効でありA群特異的遺伝子であった。ついで、この遺伝子によってコードされるmRNAを、クローニングされた遺伝子の一部をプローブにしたノザンハイブリダイゼーションで調べた。供与体マウス細胞とUV抵抗性XPトランスフェクタントには約1KbのmRNAが、正常ヒト細胞では1.3Kbと1KbのmRNAが認められた。一方、異なる3家系のA群XP細胞には、これらのいずれのmRNAも認められなかった。これらのマウス及びヒトmRNAに対応するcDNAを、pcD_2Okayama-BcrgcDNAライブラリーよりクローニングした。A群XP細胞のDNA修復能を回復させ得る完全長cDNAクローンは、マウス、ヒトともに、約200万個に1個の割合でとれ、そのサイズは、マウス1Kb、ヒト1.4Kbであった。ヒトcDNAをプローブにして、A群XP細胞のゲノムDNA及びmRNAを調べた。サザンブロッティングでは、10家系のA群XPと正常者間に相異は認められなかったがサザンブロッティングでは、いずれのA群XPでも、1.4Kbと1KbのmRNAは欠損していた。B、C、D、F、G群XPでは正常者と変わらず、2つのmRNAが認められた。

Xeroderma pigmentosum (XP) group A gene mutation Group A XP cells showed high sensitivity to DNA repair and ultraviolet light (UV). XP cells were obtained by co-precipitation of DNA and UV resistance. In addition, the UV resistance of the X-ray tube contains DNA repair gene, EMBL3 gene and DNA repair gene. The DNA repair ability of XP in group A of two different families can be restored to that of XP in group B, C, D, F and G. The expression of mRNA, protein and protein in the genome of the mouse is very important. In donor cells, UV-resistant XPs are about 1Kb mRNA, whereas in normal cells, they are about 1.3 kb mRNA. A group of XP cells from three families were identified by mRNA. The expression of the cDNA in the mRNA and protein of pcD_2 Okayama-Bcrg was detected by PCR. The DNA repair ability of XP cells in group A was restored to full length cDNA. About 2 million DNA fragments were isolated from XP cells. cDNA and mRNA are regulated in group A XP cells. 1.4Kb mRNA was found to be deficient in group A. Group B, C, D, F, G XP