XPAC遺伝子の分子遺伝学的解析

XPAC基因的分子遗传学分析

• 批准号: 02152064
• 负责人: 田中 亀代次
• 金额: $ 6.4万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152064/
• 关键词: 色素性乾皮性; DNA修復; 遺伝子クロ-ニング; 遺伝病; Znフィンガ-; スプライシング異常; RFLP; ノンセンス突然変異

日光照射部位の皮膚癌高発と神経細胞死に起因する種々の精神神経症状を臨床的特徴とし、DNA修復能に異常をもつ色素性乾皮性(xp)A群の原因遺伝子をクロ-ニングした(xpAC遺伝子)。ヒトおよびマウスXPACcDNAの塩基配列を決定し、273個のアミノ酸からなる分子量31Kの蛋白をコ-ドし、C_4タイプのZnフィンガ-モチ-フをもつ遺伝子であることを明らかにした。ヒトXPACcDNAをT7ファ-ジ発現システムを用いて大腸菌で大量生産し、組換えxpac蛋白を得た。これをマイクロインジェクション法でA群XP細胞に注入すると、その不定期DNA合成は正常細胞レベルまで回復した。80bpの合成ヌクレオチドをプロ-ブにしたゲルシフト分析により、組換えxpac蛋白はDNA結合能をもつことが確認された。さらに、組換えxpac蛋白をウサギに免疫し特異的抗xpac蛋白抗体を得た。免疫沈降とSDSPAGEにより、正常ヒト細胞では約40Kのxpac蛋白が同定されたが、A群xp細胞(XP2OS)では欠如していた。細胞をUV照射してもXPACmRNAやxpac蛋白量に変化はなく、XPAC遺伝子はUVによっては誘導されないことが明らかになった。ヒトXPACゲノムを正常人およびXP2OS細胞よりクロ-ニングし、エキソンおよびエキソン・イントロン接合部の塩基配列を比較したところ、XP2OSではイントロン3のスプライシング受容部位のGがCに変異し、スプライシング異常をおこしていることを明らかにした。この変異により制限酵素AlwNIの切断部位が生じ、AlwNIRFLPにより容易にこの変異を検出できる。日本人A群XP患者21人についてこのAlwNIRFLPを調べたところ、16人はこのスプライシング変異をホモ接合性にもち、4人はヘテロ接合体であり、残り1人はこの変異をもたないことが明らかになった。

Sunlight parts の skin cancer high 発 と 経 god cause cell death に す る kind 々 の spirit god 経 を clinical symptoms of 徴 と し and abnormal DNA repair can に を も つ pigmentary dry skin sex (xp) A group of の reason but 伝 child を ク ロ - ニ ン グ し た (xpAC 伝). ヒ ト お よ び マ ウ ス XPACcDNA の salt base with を decided し, 273 の ア ミ ノ acid か ら な る 31 k の protein molecular weight を コ - ド し, C_4 タ イ プ の zinc フ ィ ン ガ - モ チ - フ を も つ posthumous son 伝 で あ る こ と を Ming ら か に し た. ヒ ト XPACcDNA を T7 has フ ァ - ジ 発 now シ ス テ ム を with い て coliform で mass-produced し, group in え xpac protein を た. こ れ を マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ ン method で に with A group of XP す る と, そ の irregularly DNA synthesis は normal cells レ ベ ル ま で reply し た. 80 bp の synthetic ヌ ク レ オ チ ド を プ ロ - ブ に し た ゲ ル シ フ ト analysis に よ り, group in え xpac protein は DNA binding energy を も つ こ と が confirm さ れ た. Youdaoplaceholder0, exchange the えxpac protein をウサギに, immunize with an anti-xpac protein antibody specifically for the anti-anti-xpac protein を to obtain た. Immune sink と SDSPAGE に よ り, normal ヒ ト cells で は about 40 k の xpac protein が with fixed さ れ た が cells (XP2OS), A group of xp で は owe such as し て い た. Cell を UV irradiation し て も XPACmRNA や xpac protein quantity に variations change は な く, xpac but 伝 は UV に よ っ て は induced さ れ な い こ と が Ming ら か に な っ た. ヒ ト XPAC ゲ ノ ム を normal お よ び XP2OS cells よ り ク ロ - ニ ン グ し, エ キ ソ ン お よ び エ キ ソ ン · イ ン ト ロ ン joints の salt base with column を compare し た と こ ろ, XP2OS で は イ ン ト ロ ン 3 の ス プ ラ イ シ ン グ by let parts の G が C に - different し, ス プ ラ イ シ ン グ abnormal を お こ し て い る こ と を Ming ら に に た. The limitations こ の - different に よ り enzyme AlwNI の が じ, cut parts AlwNIRFLP に よ り easy に こ の - different を 検 out で き る. A group of Japanese patients with XP 21 people に つ い て こ の AlwNIRFLP を adjustable べ た と こ ろ, 16 people は こ の ス プ ラ イ シ ン グ - different を ホ モ connectivity に も ち, four people は ヘ テ ロ gametes で あ り 1 and residual り は こ の - different を も た な い こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Satokata,I.,Tanaka,K.,et al.: "Characterization of a splicing mutation in group A xeroderma pigmentosum" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87. 9908-9912 (1990)

Satokata,I.,Tanaka,K.,et al.：“A 组色素性干皮病剪接突变的表征”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

Satokata, I., Tanaka, K. et al: "Three nonsense mutations responsible for group A xeroderma pigmentosum" Mutat. Res.

Satokata, I.、Tanaka, K. 等人：“导致 A 组着色性干皮病的三种无义突变”突变。

Tanaka, K., Miura, N. et al.: "Analysis of a human DNA excision repair gene involved in group A xeroderma pigmentosum and containing a zinc-finger domain." Nature. 348. 73-76 (1990)

Tanaka, K.、Miura, N. 等人：“对 A 组色素性干皮病中涉及并含有锌指结构域的人类 DNA 切除修复基因的分析。”