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A群色素性乾皮症蛋白のDNA修復機能の解析

A组着色性干皮病蛋白的DNA修复功能分析

基本信息

批准号：
05152068
负责人：
田中亀代次
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

A群色素性乾皮症の原因遺伝子(XPA遺伝子)をクローニングし、C4タイプのZnフィンガーモチーフを持つ273個のアミノ酸からなる親水性蛋白をコードする事を明らかにした。XPA遺伝子の機能を解析する為、大腸菌内でXPA cDNAを発現させ組換えXPA蛋白を精製した。ゲルシフト法、フィルター結合法でXPA蛋白のDNA結合能を調べたところ、XPA蛋白は何も処理していないDNAにも結合したが、紫外線(UV)、シスプラチン、AAF、OsO4処理したDNAにはより多くのXPA蛋白が結合し、XPA蛋白は種々のDNA障害を認識する機構に関わる蛋白である事が示唆された。ついで、αキモトリプシンによる部分分解とUV照射したDNAをプローブに用いたサウスウエスタン法、さらに、N末端アミノ酸シークエンス法により、XPA蛋白のDNA結合ドメインを決定した。C4タイプのZnフィンガードメインを含む約20kDaの短縮XPA蛋白で完全長のXPA蛋白と同等のDNA結合能が認められた。従って、XPA蛋白のC末端はDNA結合能には関与せず、他のDNA修復機能に関与すると考えられた。事実、C末端は種間でよく保存されていた。この部分は、DNA除去修復過程において、XPA蛋白が他のDNA修復蛋白と結合するドメインではないかと推測した。事実、幾つかの蛋白がこの領域を含む部分でXPA蛋白と結合した。また、XPA蛋白がERCC1、XPB、PCNAと結合する事も明らかにした。一方、ES細胞を用いた遺伝子ターゲッテイング法によりXPA欠損マウスを樹立した。このマウスは形態上あるいは行動上明らかな異常を認めないが、XPA欠損マウス由来の繊維芽細胞は、A群XP細胞と同様にUVに高感受性を示し、DNA除去修復能は欠如していた。さらに、化学発癌剤DMBAをXPA欠損マウスの皮膚に塗布すると、一週間後に強い潰瘍が形成され、一ケ月後にはその部分にパピローマが発生した。正常およびヘテロ接合体マウスでは潰瘍はみとめられず、パピローマの発生も低頻度でずっと後期になって認められるのみであった。このマウスは発癌性に関してXPの良いモデルになると思われた。

Group A Xeroderma pigmentosum causative gene (XPA gene) has been identified as the causative gene of group A Xeroderma pigmentosum, and 273 hydrophilic proteins have been identified as the causative gene of group A Xeroderma pigmentosum. XPA cDNA function analysis, XPA cDNA expression in E. coli, XPA protein purification XPA protein DNA binding ability is modulated by the XPA binding method, XPA protein treatment, DNA binding, ultraviolet (UV), AAF, OsO4 treatment, DNA binding, XPA protein species DNA damage recognition mechanism related to protein. DNA binding to XPA protein is determined by the method of DNA binding, α-terminal DNA binding, and UV irradiation. C4 protein contains a shortened XPA protein of about 20kDa and a fully elongated XPA protein with equivalent DNA binding energy. The C-terminal region of XPA protein is involved in DNA binding activity and other DNA repair functions. The C terminal is reserved for the purpose of conservation. This part of the DNA removal repair process, XPA protein and other DNA repair protein binding, is speculated to be the most important. The protein binding domain contains some XPA protein. It is also clear that XPA proteins bind to ERCC1, XPB, and PCNA. A party, ES cells in the middle of the child to use the method of XPA damage to establish XPA is deficient in DNA repair and DNA removal. XPA is deficient in DNA repair. XPA is deficient in DNA repair and DNA removal. The chemical agent DMBA was used for the treatment of cancer. The frequency of the reaction is very low. This is the first time I've ever seen a woman.