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枯草菌細胞分化の遺伝子ネットワークの全体像

枯草芽孢杆菌细胞分化基因网络全貌

基本信息

批准号：
12206003
负责人：
佐藤勉
金额：
$ 20.48万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12206003/
关键词：
枯草菌細胞分化胞子形成分子生物学

项目摘要

枯草菌機能未知遺伝子破壊株バンクを用いて、胞子の耐熱性を指標にしたスクリーニングから得られた遺伝子の機能解析を進めた。昨年度報告したyaaT, ybdAB, yqjE, ykvVのうち、ykvV, ydiHのより詳細な解析を行い、それぞれσ^Kの活性化とコルテックス合成に関与するタンパク質、胞子形成開始期に必要なDNA結合タンパク質をコードすることを明らかにした。また、EUのグループにより作製された約1200株の遺伝子破壊株についても同様に調べ、8個の胞子形成に関与する遺伝子を見出し、特にymcA, ytcFは胞子形成開始期に重要な働きをもつことが示された。さらに、機能が推定されている遺伝子としてdgkA(diacylglycerolkinase)は、細胞膜合成に関わることが推定されるが、胞子形成期においてはコルテックス形成に関与することを明らかにした。LC/MS/MS解析により得られた約150種類のタンパク質のうち、約30種類の遺伝子について、LacZアッセイにより示されていた発現制御因子に対応するプロモーター配列を推定することができた。上記の遺伝子についてGFP融合タンパク質生産株の作製も終了した。蛍光顕微鏡により観察されたGFP融合タンパク質の局在部位は、遺伝子発現制御因子とタンパク質のアミノ酸配列をもとに推定されていた局在部位とほぼ一致することが分かった。また、GFP融合タンパク質の蛍光が確認された場合でも、GFP融合タンパク質が胞子から抽出されず、免疫ブロッティングで検出されない場合があることがわかった。一方、細胞分化の過程を連続的に追うために必要な蛍光顕微鏡によるタイムラプス画像を得る方法を確立した。細胞膜をFM4-64、DNAをSYTO16で染色し、GFP融合タンパク質の局在をシングルセルで動画として捕らえることが可能となった。

It is not known that the subtilis machine can break the strain, the cell tolerance index and the cell endurance index can be analyzed. In yesterday's annual report, yaaT, ybdAB, yqjE, ykvV, ykvV, ydiH were analyzed in terms of the number of factors, the activation of the synthesis process, and the cell formation process. It is necessary to combine the DNA with the information on the formation of cells. There were about 1200 broken embryos in the same cell cycle, 8 cell formation cycles, and special ymcA and ytcF cell formation in the first phase of cell formation, and the important cell cycle in the beginning period of cell formation. It is presumed that dgkA (diacylglycerolkinase), cell membrane synthesis, cell formation, and cell formation. The results of LC/MS/MS analysis show that there are about 150 percent of the total data, 30 percent of the data, and three hundred and thirty percent of the data. The LacZ analysis shows that there are significant differences between the two groups. In the last part of the study, the GFP fusion was used to give birth to the plant. In the light, it is necessary to observe that the GFP fusion is in the position, the control factor is in the position, and the control factor is in the position. The fusion of GFP and GFP confirmed that the cells were closed, the cells were extracted, and the immunity was detected. On the one hand, the process of cell differentiation is linked. It is necessary to make sure that the portrait method is correct. Cell membrane FM4 -, DNA SYTO16 staining and GFP fusion were used in this study.