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枯草菌胞子形成期におけるDNA再編成

枯草芽孢杆菌孢子形成阶段的 DNA 重排

基本信息

批准号：
07780598
负责人：
佐藤勉
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、SpoIIIDが組換え酵素の転写とDNA再編成に独立に関与していることを明らかとするために、spoIVCAとspoIIIDのプロモーターを枯草菌で誘導可能なプロモーターであるspacプロモーターの制御下に置き、栄養増殖期で同時に発現させた際のDNA再編成の有無を調べることを目的とした。spoIVCAを栄養増殖期に強制発現させ、DNA再編成の有無をみたところ、栄養増殖期ではDNA再編成は検出されず胞子形成期(T_3)に検出された。また、spoIIID変異株では、spoIVCAを強制発現させても胞子形成期にDNA再編成は検出されなかった。この結果から、SpoIIIDはDNA再編成に直接関与することが強く示唆された。spoIVCAとspoIIIDの同時発現系による証明は、現在おこなっている。次に、SpoIIIDが結合する遺伝子を探索をおこなった。SpoIIIDのC末端側に6個のヒスチジンが付加されたSpoIIID-hisをNi^<2+>-NTA(nitrilo-triacetic acid)アガロースに結合させ、枯草菌染色体DNAをを制限酵素により断片化し、このカラムに吸着させた。SpoIIID-hisに結合するDNA断片をイミダゾール濃度勾配により溶出し、このDNA断片を大腸菌のプラスミドベクターにクローン化し、その塩基配列を決定した。この結果、この中にはプリンおよびピリミジン合成系の遺伝子が存在し、これらの構造遺伝子内にSpoIIIDが結合することが明らかとなった。この結果から、SpoIIIDは、spoIVCAなどの胞子形成期に働く遺伝子を正または負に、また栄養増殖期に必要な遺伝子の発現を抑制している可能性が示唆された。

In this study, SpoIIID was used to control the development of DNA reassembly in vitro, and SpoIVCA was used to control the development of DNA reassembly in vitro. spoIVCA is the most important factor in the development of DNA in the process of reproduction. DNA recombination during sporogenesis This result is directly related to SpoIIID DNA recombination. SpoIVCA and spoIIID are simultaneous occurrences. The second time, SpoIIID is combined with the second time. SpoIIID-his Ni^<2+>-NTA(nitrilo-triacetic acid) is the most common enzyme in the C-terminal region of SpoIIID. DNA fragment binding to SpoIIID-his is determined by concentration matching, dissolution, and nucleotide alignment of DNA fragments in E. coli. As a result, there is a genetic component in the synthetic system, and there is a genetic component in the structural component. The results showed that SpoIIID was negative, spoIVCA was positive, and SpoIIID was negative, spoIVCA was negative, spoIIID was negative, and SpoIIID was negative.