ヒト末梢神経神経内膜由来内皮細胞培養系の確立とヒト血液神経関門培養モデル作成の試み

人周围神经内膜源性内皮细胞培养体系的建立并尝试建立人血神经屏障培养模型

• 批准号: 13035012
• 负责人: 神田 隆
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13035012/
• 关键词: 血液神経関門; 神経免疫学; サイトカイン; 血管内皮細胞; 血液脳関門; 炎症性ニューロパチー; 細胞生物学; 免疫性ニューロパチー; 末梢神経障害; 抗糖脂質抗体; ギラン・バレー症候群; VEGF; NF-kB

血液脳関門(BBB)と比較して末梢神経系のバリアーシステムである血液神経関門(BNB)の研究は遅れをとっているが、その原因の一つは、BNBの主座である末梢神経神経内膜由来内皮細胞(PnMEC)の培養がその技術的困難から長らく成功していかったことにある。研究者らはこの数年来ウシPnMECを用いてBNBのモデルを作成し、いくつかの業績をあげてきたが、分子レベルでのバリアー破綻・修復機序の解明にはヒト細胞の入手が急務と考え、この2年間の目標をBNBを構成するヒト末梢神経神経内膜微小血管内皮細胞(HPnMEC)の大量純培養法の確立においた。培養液を含む培養条件の調整の結果、剖検材料を用いての同細胞の培養が可能となった。剖検坐骨神経または馬尾神経の神経内膜組織を分離し、我々の開発したウシPnMEC培養法(J Neurosci Res 1997)を一部改変した手法に基づいて酵素処理を行った。10-21日後に純粋なHPnMECのみからなるコロニーをクローニングし、これからHPnMECのmassを得た。HPnMECはcontact inhibitionを示す単層を成し、Dil-Ac-LDLとりこみおよびvon Willebrand抗原陽性で、ウシ脳毛細血管由来内皮細胞(BMEC)やウシPnMECと同じく細長いfibroblastに類似した形態を示した。培養条件の調整により、ヒトPnMECも純培養が可能であることが初めて示されたが、純粋なコロニーの収率が充分ではなく、cell massを使っての生化学的分析までは未だ至っていない。しかし、ある程度の長期にわたって培養可能な、ほぼ純粋なヒトPnMECが得られた意義は大きく、今後のBNBの細胞学的研究や炎症性ニューロパチーの治療法の開発にあたって大きな寄与をなすものと考えられる。

The study of blood neuroturbination (BBB) and peripheral neuroturbination (PnMEC) has been discussed in this paper. The researchers have been using PnMEC for several years to establish a pure culture method for BNB microvascular endothelial cells (HPnMEC) in large quantities. The culture medium contains the results of adjustment of culture conditions, and the culture of the same cells can be achieved by using the same materials. The development of PnMEC culture method (J Neurosci Res 1997) for the isolation of the cauda equina and the treatment of enzymes in the brain was partially modified. 10-21 In the future, the HPnMEC will be pure and the HPnMEC will be mass. HPnMEC contact inhibition is shown in single layer, Dil-Ac-LDL, von Willebrand antigen positive, capillary derived endothelial cells (BMEC) and PnMEC, elongated fibroblast and similar morphology. The adjustment of culture conditions, cell mass and PnMEC purity culture is possible, and the cell mass is sufficient for biochemical analysis. The significance of long-term culture and purification of PnMEC is significant. Future cytological research on BNB and development of treatment for inflammatory diseases are also important.

项目成果

Takashi Kanda et al.: "Sera from Guillain-Barre patients enhance leakage in blood-nerve barrier model"Neurology. 60. 301-306 (2003)

Takashi Kanda 等人：“来自吉兰-巴利患者的血清增强了血神经屏障模型中的渗漏”神经病学。

神田 隆: "神経精神疾患治療のEBM.慢性炎症性脱髄性多発根ニューロパチー"脳の科学. 24. 289-295 (2002)

Takashi Kanda：“EBM 用于治疗神经精神疾病。慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经根神经病”《脑科学》24. 289-295 (2002)。

Takashi Kanda et al.: "Glycosphingolipid antigen and blood-nerve barrier"Recent Research Developments in Lipids. 5. 97-105 (2001)

Takashi Kanda 等人：“糖鞘脂抗原和血神经屏障”脂质的最新研究进展。

Kanda, T., Ariga, T: "Glycosphingolipid antigen and blood-nerve barrier"Recent Res.Dev.Lipids. 5. 97-105 (2001)

Kanda, T.、Ariga, T：“鞘糖脂抗原和血神经屏障”Recent Res.Dev.Lipids。

藤本陽子ほか: "CD83によるミクログリア活性化の制御"神経免疫学. 10. 243-249 (2002)

Yoko Fujimoto 等人：“CD83​​ 对小胶质细胞激活的控制”《神经免疫学》10. 243-249 (2002)。