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癌抑制遺伝子を長期間高レベルで発現する新規レトロウイルスベクターとその産生系

一种可长时间高水平表达抑癌基因的新型逆转录病毒载体及其生产系统

基本信息

批准号：
13218022
负责人：
伊庭英夫
金额：
$ 25.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

15年度までの成果から、クロマチン構造変換因子SWI/SNF複合体の触媒サブユニットBrmがMuLVを基盤とするレトロウイルスベクターの発現維持に必須であることが示唆されてきた。そこで本研究では宿主の内在性Brmの機能とその生合成過程の制御の解析から開始した。調べた40株のヒト腫瘍由来細胞株の中にBrmの発現を欠失する細胞株を7株同定した。これらの細胞株では例外なく極めて速いジーンサイレンシングを受けることからレトロウイルスの発現維持には、「Brm型SWI/SNF複合体」が必須であることが示された。またこれらの細胞内ではいずれもBrm遺伝子の転写開始・伸長はおきているが、そのmRNAは検出されず、この遺伝子が後転写レベルで抑制されていることが示された。さらにLTR領域に変異を入れ、Brm発現欠失細胞内でもジーンサイレンシングに耐性でかつ自己不活化型のレトロウイルスベクターの作出に成功した。またBrmタンパク質の発現抑制は一過的にHDAC阻害剤で処理することにより数週間にわたって持続して解除され、それに伴い処理を受けた細胞ではレトロウイルスがジーンサイレンシングを受けにくくなることを示した。Brm遺伝子自身に癌抑制活性があることも示し、Brm発現欠失細胞をHDAC阻害剤で処理すれば、Brmタンパク質の誘導の誘導によりその発癌性を低下させることができる上に、レトロウイルスベクターによる外来遺伝子の発現維持効率を著しく改善しうることが判明した。この成果は、Brm欠失細胞株に対する癌遺伝子治療法に極めて有用な知見を与えた。

The results of the 15-year project show that the structural transformation factor SWI/SNF complex catalyst is necessary for the development and maintenance of the MuLV matrix. This study begins with the analysis of host intrinsic Brm functions and biosynthetic processes. 7 out of 40 cell lines from which Brm was detected were identified. The cell lines of this species are very sensitive to the changes in the expression of SWI/SNF complex. The expression of mRNA in the cells was detected by PCR, and the expression of mRNA was detected by PCR. Today, as changes have occurred in the field of LTR, Brm has discovered that it has lost the patience of intracellular support and has been successful in making its own inactive form of LTR. For example, if you want to use a computer, you can use a computer to control your computer. The results showed that the tumor suppressor activity of Brm gene itself was lower than that of HDAC inhibitor, and the tumor suppressor activity of Brm gene was lower than that of HDAC inhibitor, and the tumor suppressor activity of Brm gene was higher than that of HDAC inhibitor. The results of this study are very useful for cancer gene therapy.