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ニワトリ初期胚を材料系とした,fes遺伝子ファミリ-の発現様式とその制御機構

以早期鸡胚为材料系统的fes基因家族的表达模式及调控机制

基本信息

批准号：
02258206
负责人：
伊庭英夫
金额：
$ 1.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、ニワトリ胚に由来する初代培養細胞を材料系に選び、<fra>___ーー2遺伝子の特異的な発現や外部制激に特異的な発現を解析することから開始した。さらに<fra>___ーー2遺伝子産物(Fraー2)に対する生化学的研究をおこなうことによりFraー2の発生、分化における機能を総合的に検索することを同時に開始した。1.血清飢餓により休止期にあるニワトリ胚線維芽細胞(CEF)を血清やTPA、cーAMP、カルシウムイオノフォアにより刺激すると、6.8kと5.7kの<fra>___ーー2 mRNAの一過的な発現をしめしたが、誘導のkineticsは、<fos>___ー mRNAよりやや遅れ、またshutーoffが起こる時期も<fos>___ーのそれよりかなり遅れた。注目すべきことは、休止期においても6.8kのfraー2 mRNAのみがbasal levelでの発現を示す点である。実際に、休止期においては、低いレベルでリン酸化を受けた40ー46kにわたる種々の分子種のFraー2タンパク質が特異抗体により検出され、これらは血清刺激により、強いリン酸化を受けて46kのタンパクへとすみやかに変化した。リン酸化を受けるアミノ酸は、セリン残基のみであって、リン酸化の程度にかかわらず、Fraー2は、細胞内で効率よくcーJunとheterodimerを形成可能であった。CEF内で観察されるbasal levelのAPー1結合活性は、このFraー2/Jun heterodimerによるものと考えられる。2.ニワトリcーDNAライブラリ-の中から、<fra>___ーー2 mRNAのcーDNAを単離し、<in>___ー<vitro>___ーでFraー2の生化学的性質を調べて以下の結果を得た。1)Fraー2は、FosとほぼおなじkineticsでJunと結合し、安定なheterodimerを形成する。2)このheterodimerは、Fos/Junと同様、種々のAPー1をふくむエンハンサ-と結合する。3)Fraー2は、Fosと異なり、Junとともにcotransfection法でF9細胞中で発現させてもTREーCATのレポ-タ-からの転写を促進しない。4)Fraー2とFosのキメラタンパク質の解析から、Fosの転写活性化配列はC端側にある。

This year, the origin of primary culture <fra>cell line selection,___-2 gene specific development and external stimulation specific development analysis began. At <fra>the same time, the biochemical research on Fra-2 gene product (Fra-2) began. 1. Serum TPA, c-AMP, c-AMP<fra>, <fos>c<fos>- The expression of fra-2 mRNA at basal level was detected in the resting period. In fact, during the telogen period, Fra-2 protein of molecular species in the 40 - 46k range that are subject to low-level acidification has been detected by specific antibodies, which are modified due to serum stimulation and strong acidification at the 46k level. The degree of acidification is different from that of Fra 2, and the formation of heterodimer is possible. CEF detects the basal level of AP-1 binding activity, Fra-2/Jun heterodimer, etc. 2. The following results were obtained by adjusting the biochemical properties of Fra-<fra>2 mRNA and c-DNA<in><vitro>. 1)Fra-2, Fos 2) Heterodimer, Fos/Jun, same, species AP 1, 3)Fra-2, Fos-1, Jun-2, cotransfection, F9 cells, TRE-2, Fos-2, Fos-2, Fos-3, Fos-4, Fos-2, Fos-3, Fos-4, Fos-4, Fos-4, 4)Fra-2 and Fos are the most important elements in the analysis of the substance, and Fos is the most active element in the C-terminal alignment.