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細胞のトンラスフォーメーションと発がんにおける内在性AP-1の機能解析

内源性 AP-1 在细胞吨位形成和癌变中的功能分析

基本信息

批准号：
06280207
负责人：
伊庭英夫
金额：
$ 9.09万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1996
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06280207/
关键词：
v-src レトロウィルスベクター AP-1 軟骨細胞細胞分化 Fra-2 初期発生 MAPキナーゼ転写制御因子トランスフォーメーション発癌遺伝子遺伝子導入トランスドミナント変異体ニワトリ胚

项目摘要

v-srcをはじめとする種々の癌遺伝子(v-fps、v-yes,c-Ha-ras,活性化raf等)でトランスフォームした細胞では、内在性AP-1の活性化がおこっており、これがトランスフォーメーションに必須であること、このAP-1の活性化はその構成成分の1つFra-2タンパク質の発現量増大とリン酸化に由来することを平成7年度までに示してきた。本研究では、「これらのトランスフォーム細胞内ではMAPキナーゼが活性化していて、それによりFra-2はそのC端側の複数箇所のリン酸化を受けて転写の負の制御因子から正の制御因子へと変換される。リン酸化Fra-2はfra-2プロモーターそれ自身にも作用して正の自己制御によりその発現量を増大させてさらに内在性のAP-1を活性化させる」との結論を導き出した。また個体レベルでのAP-1の腫瘍形成の標的特異性の決定機構解析の為にニワトリ初期胚の任意の限局された領域に外来遺伝子をレトロウィルスベクターにより異所発現させる系を開発した。そして肢芽の発生過程での軟骨分化にAP-1構成遺伝子中fosのみが阻害的に働き、長骨を短くさせること、またその短縮化活性はそのトランスフォーメーション活性と良い相関があることを見出した。また本研究では、遺伝子治療用のVSV-Gのシュードタイプ型高力価レトロウィルスベクターの開発も行い、「プレ・パッケージ細胞株」を作製しこれにCreレコンビナーゼを発現するアデノウィルスベクターを感染させることにより、VSV-Gの発現を誘導するシステムを構築した。この系により、2×10^6感染ウィルス/mlの高力価ストックが培養上清から得られ、世界の最高レベルに近い有用な細胞株であることが判明した。

v-src, v-yes,c-Ha-ras, activated raf, etc.) are essential components of AP-1 activation, which is essential for the production of essential components of AP-1. The reasons for this increase in the production of essential components of AP-1 are shown in the seventh year of Heisei. In this study, we found that the intracellular MAP were activated, the C-terminal of Fra-2 was activated, and the C-terminal of Fra-2 was activated. The results showed that the activity of AP-1 in Fra-2 increased due to its self-control effect. The determination mechanism of the specificity of AP-1 tumor formation in individuals was analyzed for the development of the system of foreign genes in any limited field of early embryo. The AP-1 gene was found to be involved in the differentiation of cartilage during the development of limb buds, and the shortening activity of fos and long bones was also found in the differentiation of cartilage. In this study, VSV-G was developed for gene therapy, and a cell line was developed to induce the development of VSV-G. This is a 2×10^6 infected cell line with high potency per ml culture supernatant and the highest useful cell line in the world.