ホヤ遺伝子発現調節領域の構造と機能の網羅的解析

海鞘基因表达调控区结构与功能综合分析

• 批准号: 14011244
• 负责人: 日下部 岳広
• 金额: $ 3.26万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011244/
• 关键词: 遺伝子発現調節; ホヤ; 神経特異的遺伝子; 転写調節領域; プロモーター解析; シスエレメント; 発生生物学

1.ホヤ幼生の神経系に特異的に発現する遺伝子の上流領域のクローニング:カタユウレイボヤのEST配列およびゲノムプロジェクトのデータを用い、約60個の神経系特異的遺伝子の上流領域を含むゲノム配列を収集した。各遺伝子の上流領域(2kb〜4kb)を単離し、それぞれをレポーター遺伝子(GFPとlacZ)につないだプラスミドを順次作製した。2.遺伝子上流領域-レポーター融合遺伝子のホヤ胚における発現解析:1で得られた上流領域にレポーター遺伝子をつないだ融合遺伝子を電気穿孔法によりホヤ胚に導入して、レポーター遺伝子の発現を調べた。神経系特異的な発現が得られ、細胞タイプ特異的な発現に関わる調節領域をみいだした。3.遺伝子上流領域の塩基配列の比較解析:単離・同定した各神経系遺伝子のオーソログを近縁種Ciona savignyiで同定し、ゲノム配列の種間比較を行った。その結果、2種は同じ属に分類される近縁種であるにも関わらず、翻訳領域以外の配列は非常に異なっていることが明らかになった。イントロンや上流領域にも種間で部分的に保存された領域がみつかり、これらは重要な転写調節配列と推定される。またこの比較により、これまで困難だった既知遺伝子との相同性がない遺伝子の5'末端の同定が容易になった。発現パターンの共通な遺伝子間で上流領域の配列を比較することにより、神経系特異的な転写に関与するシスエレメントの候補を発見した。遺伝子情報、遺伝子上流領域の塩基配列、シスエレメントの情報、上流領域の機能解析結果のデータベース化を進めた。

1. ホ ヤ larval の god 経 department に specific に 発 now す る posthumous son 伝 の upper field の ク ロ ー ニ ン グ : カ タ ユ ウ レ イ ボ ヤ の EST match column お よ び ゲ ノ ム プ ロ ジ ェ ク ト の デ ー タ を い, about 60 の god 経 system specific heritage 伝 son の を upper field containing む ゲ ノ ム match column を 収 set し た. The heritage 伝 son の upper field (2 KB ~ 4 KB) を 単 し, そ れ ぞ れ を レ ポ ー タ ー heritage 伝 child (GFP と lacZ) に つ な い だ プ ラ ス ミ ド を progressive cropping し た. 2. Heritage 伝 child upper field - レ ポ ー タ ー fusion heritage 伝 son の ホ ヤ embryo に お け る 発 is analytic: 1 で ら れ た upper field に レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を つ な い だ fusion heritage 伝 son を 気 perforation method に よ り ホ ヤ embryo に import し て, レ ポ ー タ ー heritage 伝 son の 発 now を adjustable べ た. God 経 system specific な 発 が must now ら れ, cell タ イ プ specific な 発 now に masato わ る adjust field を み い だ し た. 3. Heritage 伝 child upper field の salt base with column の is analytic: 単 leaves, with fixed し た each god 経 system heritage 伝 son の オ ー ソ ロ グ を about try species Ciona savignyi で with し, ゲ ノ ム match column の を is compared between rows っ た. そ の classification results, with two は じ に さ れ る about try species で あ る に も masato わ ら ず, turn 訳 areas outside の match column は very に different な っ て い る こ と が Ming ら か に な っ た. イ ン ト ロ ン や upper field に も interspecific で part に save さ れ た field が み つ か り, こ れ ら は important な planning write tuning と presumption さ れ る. ま た こ の is に よ り, こ れ ま で difficult だ っ た son already know but 伝 と の identity が な い posthumous son 伝 の 5 'end の with fixed が easy に な っ た. 発 now パ タ ー ン の な common heritage 伝 の で high field match column を comparison between child す る こ と に よ り, god 経 specific な planning write に masato and す る シ ス エ レ メ ン ト の alternate を 発 see し た. Heritage 伝 child intelligence, but 伝 upper field の salt base columns, シ ス エ レ メ ン ト の の function intelligence, high field analytical results の デ ー タ ベ ー ス change を into め た.

项目成果

Yuki Nakashima: "Origin of vertebrate visual cycle : genes encoding retinal photoisomerase and two putative visual cycle proteins are expressed in_whole brain of a primitive chordate"Journal of Comparative Neurology. (印刷中). (2003)

Yuki Nakashima：“脊椎动物视觉周期的起源：编码视网膜光异构酶和两种假定的视觉周期蛋白的基因在原始脊索动物的整个大脑中表达”《比较神经学杂志》（2003 年）。

Takehiro Kusakabe: "Phototransduction and visual cycle in the ascidian tadpole larva"Journal of Photoscience. 9・2. 37-40 (2002)

Takehiro Kusakabe：“海鞘蝌蚪幼虫的光转导和视觉周期”《光科学杂志》9・2（2002）。

Yutaka Satou: "Ciona intestinalis cDNA projects : EST analyses and gene expression profiles during embryogenesis"Gene. 287・1-2. 83-96 (2002)

佐藤裕：“海鞘cDNA计划：胚胎发生过程中的EST分析和基因表达谱”基因287・1-96。

Takehiro Kusakabe: "Gene expression profiles in tadpole larvae of ciona intestinalis"Developmental Biology. 242・2. 188-203 (2002)

Takehiro Kusakabe：“海鞘蝌蚪幼虫的基因表达谱”发育生物学242・2（2002）。

Reiko Yoshida: "Central nervous system-specific expression of G protein alpha subnits in the ascidian Ciona intestinalis"Zoological Science. 19・10. 1079-1088 (2002)

Reiko Yoshida：“海鞘中 G 蛋白 α 亚基的中枢神经系统特异性表达”动物学科学 19・10（2002）。