ホヤ幼生脳胞における視細胞の分化機構の解析

海鞘幼虫脑泡感光细胞分化机制分析

• 批准号: 13780594
• 负责人: 日下部 岳広
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780594/
• 关键词: ホヤ; 眼点; 視細胞; オプシン遺伝子; 神経系; 細胞分化; 転写調節; Pax-6遺伝子

1.視細胞特異的遺伝子の転写調節領域の機能解析:カタユウレイボヤの視細胞特異的遺伝子Ci-opsin1およびCi-arrと、近縁種Ciona savignyiのオーソログCs-opsin1およびCs-arrの上流領域間で保存された配列を検索し、いくつかのシス調節配列の候補がみいだされた。上流領域とGFPとの融合遺伝子をホヤ胚に導入し、Ci-arrの上流-2.9kb〜-1.7kbの間に視細胞特異的な発現に関わるシス配列が存在することが示唆された。2.視細胞特異的な転写調節に関わる因子のcDNAクローニング:眼点の発生に関わる転写因子の候補としてPax-6、Six3/6、Pax-2/5/8のホモログ(Ci-Pax6、Ci-Six3/6、Ci-Pax258a、Ci-Pax258b)をコードするcDNAを単離・同定した。3.視細胞特異的遺伝子発現に関わる転写調節因子の発現様式の解析:Ci-Pax6、Ci-Six3/6、Ci-Pax258a、Ci-Pax258bの発現パターンをin situハイブリダイゼーション法により解析した。Ci-Six3/6、Ci-Pax258a、Ci-Pax-258bの発現は胚および幼生の眼点ではみられなかった。Ci-Pax6の発現は神経胚および尾芽胚の脳胞の一部と神経索の前方部で、幼生では眼点視細胞付近でみられた。4.視細胞特異的遺伝子発現に関わる転写調節因子の機能解析:アンチセンス・モルフォリノオリゴ(MO)による特異的遺伝子機能阻害を試みた。Ci-opsin1とCi-arrのMOを卵膜で覆われた受精卵に顕微注入して得られた幼生では、視細胞で各タンパク質が失われていることが抗体を用いて確認された。Ci-opsin1に対するMOを注入した幼生は光に対する反応を示さない。Ci-Pax6に対するMOの導入も行なったが、眼点の発生に異常は認められなかった。

1. Functional analysis of the regulatory domain of optic cell-specific genes: Ciona-opsin 1 and Ciona-arr; Ciona savigyi 1 and Ciona-arr; Ciona-opsin 1 and Ciona-arr; Ciona-savigyi 2 and Ciona-arr; Ciona-opsin 1 and Ciona-arr; Ciona-savigyi 3 and Ciona-arr; Ciona-opsin 1 and Ciona-arr; Ciona-arr; Ciona-savigyi 3 and Ciona-arr; Ciona-opsin 1 and Ciona-arr; Ciona-arr. In the upstream region, GFP and fusion genes are introduced into the embryo, and Ci-ARR and upstream-2.9 kb to-1.7 kb are associated with the existence of a sequence specific to the visual cell. 2. cDNA translation of factors involved in visual cell-specific transcription regulation: cDNA translation of candidate transcription factors involved in the development of eyepoints: Pax-6, Six3/6, Pax-258 (Ci-Pax6, Ci-Six3/6, Ci-Pax 258a, Ci-Pax 258b). 3. Analysis of the expression patterns of regulatory factors related to the development of visual cell-specific genes:Ci-Pax6, Ci-Pax 3/6, Ci-Pax 258a, Ci-Pax 258b Ci-Six3/6, Ci-Pax 258a, Ci-Pax-258b and Ci-Pax-258b Ci-Pax6 is developed in the anterior part of the neurochord and in the posterior part of the caudal embryo. 4. Functional analysis of regulatory factors related to the development of specific receptors in visual cells: A study of functional inhibition of specific receptors in visual cells Ci-opsin1, Ci-arr and MO are used to identify the zygote by microinjection. Ci-opsin1 is injected into the brain. Ci-Pax6: MO's import behavior, eye point's occurrence, abnormal recognition

项目成果

Takehiro Kusakabe: "Phototransduction and visual cycle in the ascidian tadpole larva"Journal of Photoscience. 9・2. 37-40 (2002)

Takehiro Kusakabe：“海鞘蝌蚪幼虫的光转导和视觉周期”《光科学杂志》9・2（2002）。

Takehiro Kusakabe: "A cis-regulatory element essential for photoreceptor-specific expression of a medaka retinal guanylyl cyclase gene"Development Genes and Evolution. 211・3. 145-149 (2001)

Takehiro Kusakabe：“青鳉视网膜鸟苷酸环化酶基因的光感受器特异性表达所必需的顺式调节元件”，Development Genes and Evolution 211・3（2001）。

Yuki Nakashima: "Origin of vertebrate visual cycle : genes encoding retinal photoisomerase and two putative visual cycle proteins are expressed in_whole brain of a primitive chordate"Journal of Comparative Neurology. (印刷中). (2003)

Yuki Nakashima：“脊椎动物视觉周期的起源：编码视网膜光异构酶和两种假定的视觉周期蛋白的基因在原始脊索动物的整个大脑中表达”《比较神经学杂志》（2003 年）。

Takehiro Kusakabe: "Evolution of anural development in ascidians : role of muscle-specific differentiation genes"The Biology of Ascidians. 1. 235-239 (2001)

Takehiro Kusakabe：“海鞘类肛门发育的进化：肌肉特异性分化基因的作用”海鞘类生物学。

Takehiro Kusakabe: "Gene expression profiles in tadpole larval of Ciona intestinalis"Developmental Biology. 242・2. 188-203 (2002)

Takehiro Kusakabe：“海鞘蝌蚪幼虫的基因表达谱”发育生物学242・2（2002）。