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新たに発見された活性型L1トランスポゾンを利用した突然変異マウス作出と遺伝子同定

利用新发现的激活L1转座子创建突变小鼠并进行基因鉴定

基本信息

批准号：
14013027
负责人：
森政之
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013027/
关键词：
レトロトランスポゾンラット L1 突然変異 Chediak-Higashi Lyst

项目摘要

ラットのlysosomal trafficking regulator (Lyst)遺伝子内に存在するL1b配列に関して以下の知見を得た。1.ACI-beigeラットにおけるChediak-Higashi症候群様の症状の原因が、Lyst遺伝子内に存在する二つのL1間の組み換えに起因することを明らかとした。そのうちの一つであるL1bの全長をクローニングし、塩基配列の決定を行なった結果、2つのオープンリディングフレーム(ORF1とORF2)とその5'上流域にSp1ボックスを含むプロモーター様配列、3'下流域にpoly A配列、またその全長の上下流に短い反復配列が認められ、典型的なL1レトロトランスポゾン構造を有していることが明らかとなった。ORF2にコードされる蛋白質のアミノ酸配列は、これまでに報告されているヒトおよびマウスの活性型L1配列のものと非常に高い相同性を示した。対照的にORF1にコードされる蛋白質のアミノ酸配列にはORF2産物ほどの高い相同性は認められず、種特異性が明らかとなった。同じLys遺伝子内のL1間の組み換えを有するDA-beigeラットのL1bはORF2内に1塩基欠失を有し、レトロトランスポゾン活性を喪失していることが示唆された。2.突然変異誘発に使用することを考えると生殖系列での発現が必要であるが、L1bはラット精巣で発現されていることが確認された。3.L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトすることによりレトロトランスポゾン活性を証明した。4.L1bの下流に他の遺伝子(A)を連結してHeLa細胞中で強制発現させると、遺伝子(A)のイントロンのスプライシングが抑制されることを見い出した。

The lysosomal trafficking regulator (Lyst) remains in the lysosomal trafficking regulator (Lyst). 1.ACI-beige syndrome original symptoms of Chediak-Higashi syndrome Because of the existence of Lyst's legacy, there is a group of two characters in the L1 room.そのうちの一つであるL1bのfull lengthをクローニングし、塩The result of the decision of the basic arrangement and the result of the basic arrangement, 2つのオープンリディングフレーム(ORF1とORF2) とその5' upper basin にSp1 ボックスをincluding むプロモーター様 arrangement, 3' lower basin にpoly A arrangement, またそのfull lengthのUP and DOWN, short, repeated arrangement, められ, typical なL1 レトロトランスポゾンstructuralを有していることが明らかとなった. ORF2 Protein acid complexation report The るヒトおよびマウスの active type L1 arrangement is very high and homogeneous. The にORF1 にコードされるprotein のアミノacid alignment にはORF2 product ほどの高いidentityはidentificationめられず and species-specific が明らかとなった of the 対抯.同じLys弝子内のL1间の集团みchangeえを有するDA-beigeラットのL1bはOR In F2, the base is missing and the activity of the レトロトランスポゾン activity is lost and the activity is lost. 2. It is not necessary to use the reproductive series due to sudden changes in the gender.であるが、L1bはラット精巣で発appears されていることがconfirm された. 3.L1b mammal 発appears in pCEP4, cultured HeL a cell にトランスフェクトすることによりレトロトランスポゾンActivity した. 4.L1b's obscene and obscene elements (A) are linked to each other and are forced to appear in HeLa cells.と, 缝子(A)のイントロンのスプライシングが suppresses されることを见い出した.