新たに発見された活性型L1トランスポゾンを利用した突然変異マウス作出と遺伝子同定

利用新发现的激活L1转座子创建突变小鼠并进行基因鉴定

• 批准号: 15012224
• 负责人: 森 政之
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012224/
• 关键词: レトロトランスポゾン; ラット; L1; 突然変異; Chediak-Higashi症候群; Lyst

ラットのlysosomal trafficking regulator(Lyst)遺伝子内に存在するL1b配列に関して以下の知見を得た。1.L1bのレトロトランスポゾン特性を検討する目的で、L1bを哺乳動物発現ベクターpCEP4中にクローニングし、培養HeLa細胞にトランスフェクトして、転移の生じたG418耐性コロニーを多数得た。3'RACE法によるL1bの転移挿入したHeLa細胞の染色体部位の遺伝子の同定を試みた。しかしながら、全クローンコロニーにおいてL1b内の特定の部位を使用したpoly A化が生じており、遺伝子の同定には至らなかった。そこで、L1bとG418マーカー遺伝子との間にスプライスドナーを挿入した新たな発現コンストラクトを作製した。2.serial analysis of gene expression(SAGE)法を用いて3ヶ月齢のBDF1系マウス精巣でのL1配列の発現パターンを調査した。また、老化して精巣での染色体DNAのメチル化などに乱れが生じた場合にともないL1の転写活性が変化する可能性を調査するために、29ヶ月齢のBDF1系マウス、および促進老化のモデルである14ヶ月齢のSAMP1系マウスを用いて、同様に調査を行なった。その結果、いずれの系統、月齢においてもL1配列の発現は極めて低いことが明らかとなった。L1をマウス精巣で強制発現させるためには、より強力なプロモーターを用いる必要があることが示唆された。L1bのマウス精巣での高発現を誘起するために、精巣特異的プロモーターであるヒストンH1t遺伝子のプロモーターの下流にL1bを連結した発現コンストラクトを作製した。

The following observations were made regarding the presence of L1b in the lysosomal traffic regulator(Lyst). 1. The L1b gene expression profile was studied for the purpose of detecting L1b gene expression in mammalian cells, and most of the L1b gene expression profiles in cultured HeLa cells were G418-resistant. 3'RACE method for the translation of L1b into HeLa cells and the identification of chromosomal sites A specific part of L1b is used for poly A transformation, and the same part of L1b is used for poly A transformation. G418, L1b, G418, G418 2. The serial analysis of gene expression(SAGE) method was used to investigate the occurrence of BDF1 in 3 months. In addition, we investigated the possibility of changing the activity of BDF1 in 29 months and the effect of aging on SAMP1 in 14 months. The result is that the system is in the middle of the moon, and the L1 configuration is in the middle of the moon. L1 is a powerful tool for the development of a strong and powerful force. L1b's high level of activity is induced by high level of activity, which is specific to high level of activity. L1b's activity is controlled by high level of activity.

项目成果

Guo, Mori M, Fu X, Yao J, Xing Y, Korenaga T, Li G, Matsushita T, Hosokawa M, Higuchi K: "Amyloidosis modifier genes in less amyloidogenic A/J mouse strain."Laboratory Investigations. 83(11). 1605-1613 (2003)

Guo、Mori M、Fu X、Yao J、Xing Y、Korenaga T、Li G、Matsushita T、Hosokawa M、Higuchi K：“淀粉样变性较少的 A/J 小鼠品系中的淀粉样变修饰基因。”实验室研究。

Kitagawa K, Wang J, Matsushita T, Kogishi K, Hosokawa M, Fu X, Guo Z, Mori M, Higuchi K: "Polymorphisms of mouse apolipoprotein A-II : seven alleles found among 41 inbred strains of mice."Amyloid. 10(4). 207-214 (2004)

Kitakawa K、Wang J、Matsushita T、Kogishi K、Hosokawa M、Fu X、Guo Z、Mori M、Higuchi K：“小鼠载脂蛋白 A-II 的多态性：在 41 个近交系小鼠中发现的 7 个等位基因。”淀粉样蛋白。

Guo Z, Higuchi K, Mori M: "Spontaneous hypomorphic mutations in antioxidant enzymes of mice."Free Radical Biology and Medicine. 35(12). 1645-1652 (2003)

郭Z，樋口K，森M：“小鼠抗氧化酶的自发亚形突变。”自由基生物学和医学。

Masui N, Mori M, Nishikawa T, Takagi Y, Asai H, Yanabe M, Yamasaki K, Serikawa T, Sato K: "An allele-specific genotyping method for rat Lyst (lysosomal trafficking regulator) gene."Experimental Animals. 53(1). 77-80 (2004)

Masui N、Mori M、Nishikawa T、Takagi Y、Asai H、Yanabe M、Yamasaki K、Serikawa T、Sato K：“大鼠 Lyst（溶酶体运输调节因子）基因的等位基因特异性基因分型方法。”实验动物。

Yao J, Chiba T, Sakai J, Hirose K, Yamamoto M, Hada A, Kuramoto K, Higuchi K, Mori M: "Mouse testis transcriptome revealed using serial analysis of gene expression."Mammalian Genome. 印刷中. (2004)

Yao J、Chiba T、Sakai J、Hirose K、Yamamoto M、Hada A、Kuramoto K、Higuchi K、Mori M：“使用基因表达的系列分析揭示小鼠睾丸转录组。”哺乳动物基因组。