AD病態惹起分子・リポ蛋白非結合型Aβの臨床応用

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本年度の研究実施計画に従い下記の検討を行った。(1)髄液総Aβ40/42およびリポ蛋白非結A型Aβ40/42の測定リポ蛋白非結合型Aβ40/42の作製は600μlのヒト髄液からsequence density floating超遠心法を用いてリポ蛋白分画を除去し、Aβ40/42の測定はELISAで行った。さらに、ゲルろ過法を用いて、高分子量のリポ蛋白結合型と低分子のリポ蛋白非結合型Aβ40/42を分取後、ELISAにて解析した。(2)AD脳、正常加齢脳におけるリポ蛋白結合型と非結合型Aβ40/42の検討6例のAD脳と4例の健常者脳から/トリス緩衝液と70%蟻酸によって可溶性Aβ40/42と不溶性Aβ40/42をそれぞれ抽出した。トリス緩衝液可溶性Aβ40/42からゲルろ過法を用いて、高分子量のリポ蛋白結合型と低分子のリポ蛋白非結合型Aβ40/42を分取後、ELISAとイムノブロットにて解析した。脳内両分子種の存在を確認し、AD脳でAβアミロイド沈着に直接関与する分子種はリポ蛋白非結合型Aβである傍証を得た。(3)健常者、Down症候群、AD患者における血液総コレステロール測定血液中総コレステロール濃度を測定後、総Aβ40/42及びリポ蛋白非結合型Aβ40/42との相関を検証し、AD発症のリスクファクターとなりうるかを検証した。(4)APP過剰発現トランスジェニックマウスにおける総コレステロール測定血液総コレステロール濃度と、脳Aβアミロイド沈着量、脳Aβ40/42プール量、血中Aβ40/42量との相関を検討した。(5)APP過剰発現トランスジェニックマウスのメラトニン治療APPsw miceで4ヶ月齢から15.5ヶ月齢まで0.5mg/mlのメラトニンを飲水にて投与し、脳Aβアミロイド沈着量、脳Aβ40/42プール量、脳nitrotyrosine量、寿命を指標としてメラトニンの治療効果を検討した。