単離細胞を用いたヒト消化管自然免疫機能に関わる分子基盤の解析

利用分离细胞分析人类胃肠道先天免疫功能的分子基础

• 批准号: 14021005
• 负责人: 綾部 時芳
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021005/
• 关键词: 自然免疫; 内因性抗菌ペプチド; パネート細胞; Toll様受容体; defensin; 消化管

小腸粘膜上皮の機能的単位である絨毛・陰窩軸(villus-crypt axis)を構成する上皮細胞における自然免疫機構の分子基盤と機能を解明するために,われわれがex vivo細菌感染により内因性抗菌ペプチドを含む顆粒を分泌することを明らかにした小腸パネート細胞(Paneth cell)における病原体認識機構であるToll様受容体(TLR)およびその関連遺伝子の発現を解析した。インフォームド・コンセントの下に,正常ヒト小腸粘膜からわれわれの既報により単離小腸陰窩および,さらに単離小腸陰窩から単離細胞分画を得た。単一の小腸陰窩レベルおよび単一の小腸粘膜上皮細胞レベルでTLR遺伝子および関連遺伝子の発現を,nest PCR法を併用したRT-PCR法で検討した。位相差顕微鏡観察下で,コントラストの強い粗大な分泌顆粒に富む単離パネート細胞は他の細胞群と容易に判別可能であった。単離小腸陰窩において,TLRおよびコレセプターmRNAの発現を認めた。さらに,単離パネート細胞での検討を行い,同様の結果を得た。次に,共焦点レーザー顕微鏡を用いて,単離小腸陰窩および単離細胞におけるTLRの免疫局在を検討した。TLRは陰窩の最基底部のみに局在が認められた。パネート細胞特異的マーカーであるalpha-defensin (HD5)との免疫二重染色により,TLRのパネート細胞における発現が示唆された。また,パネート細胞における局在を検討した。さらに,われわれの確立したex vivo細菌曝露によるヒト小腸パネート細胞分泌系を用いてdefensin-sensitive S. typhimuriumに対する抗菌活性アッセイを行い,パネート細胞上のTLRの機能を解析した。それらの結果,TLRがS. typhimurium刺激によるパネート細胞からのalpha-defensin分泌に関与する可能性を示した。本研究により,ヒトにおける消化管粘膜上皮細胞と微生物の直接的相互作用を明らかにした。

The unitary structure of the intestinal mucosal epithelium and the villus-crypt axis (villus-crypt axis) constitute the epithelial cell and the natural immune mechanism's molecular basis and function. vivo bacterial infection, endogenous antibacterial, granule-containing, secretion, secretion, clearing, small intestinal tract cells (Paneth cell) Pathogen recognition agency Toll receptor (TLR) related legacy 伝子の発 appear を analysis した. Normal intestinal mucosa, normal intestinal mucosaにより単および, さらに単から単単出款的 cells.単一のsmall intestinal vagina レベルおよび単一のsmall intestinal mucosal epithelial cell レベルでTLR 伝子およびassociated 伝子の発appearを,nest The PCR method can be used in combination with the RT-PCR method. Under phase contrast microscopy, it is easy to identify the possible secretion granules, thick secretory granules, and isolated cells and other cell groups under the phase contrast microscope. It is separated from the vagina of the small intestine, and TLR is removed from the vagina.さらに, 一パネートcell での検question を行い, 同様のRESULT をgetた. Next time, the confocal microscope was used, and the cells were isolated from the vagina of the small intestine and the TLR immune system was used. TLR is the most basic part of the vagina.パネートcell-specific マーカーであるalpha-defensin (HD5) Immuno-double staining, TLR cells, and TLR staining.また, パネートcell におけるbureau in を検 Discussion した. Defensin-sensitive S. The antibacterial activity of typhimurium is analyzed, and the function of TLR on cells is analyzed. As a result, the TLR S. typhimurium stimulates alpha-defensin secretion in TLR cells and the possibility is shown. This study focuses on the direct interaction between digestive tract mucosal epithelial cells and microorganisms.

项目成果

Ayabe T et al.: "Activation of Paneth cell α-defensins in mouse small intestine"J Biol Chem. 277. 5219-5228 (2002)

Ayabe T 等：“小鼠小肠中潘氏细胞 α-防御素的激活”J Biol Chem. 277. 5219-5228 (2002)

Orii F et al.: "Quotitative analysis for human glucocorticoid recepter α/β mRNA in IBD"Biochm Biophys Res Commun. 296. 1286-1294 (2002)

Orii F 等人：“IBD 中人糖皮质激素受体 α/β mRNA 的定量分析”Biochm Biophys Res Commun. 296. 1286-1294 (2002)

Watari J et al.: "Natural history of colorectal nonpolypoid adenomas : a prospective colonoscopic study and relation with cell kinetics and K-ras mutations"Am J Gastroenterology. 97. 2109-2115 (2002)

Watari J 等人：“结直肠非息肉样腺瘤的自然史：前瞻性结肠镜研究及其与细胞动力学和 K-ras 突变的关系”Am J Gastroenterology。

Taniguchi M et al.: "Genetic and Phenotypic polymorphisms of the A subunit of Coagulation Factor XIII in Japanese Population"Biochem Genet. 40. 339-349 (2002)

Taniguchi M 等：“日本人群中凝血因子 XIII A 亚基的遗传和表型多态性”Biochem Genet。