新規三日熱マラリア伝搬阻止ワクチン候補抗原の同定

鉴定一种新型疫苗候选抗原以阻止间日疟原虫疟疾的传播

• 批准号: 14021082
• 负责人: 坪井 敬文
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021082/
• 关键词: 三日熱マラリア; 伝搬阻止ワクチン; 生殖母体; 遺伝子クローニング; 国際研究者交流; タイ

1.DNA免疫法を用いた特異抗血清の作成Pvs47及びPvs48の遺伝子をクローン化した哺乳類細胞発現用プラスミドをマウス、及びラットに注射してDNA免疫を行い、Pvs47及びPvs48の立体構造を認識する抗体を誘導することを試みた。その結果、これらの抗血清と三日熱マラリア原虫生殖母体を抗原に用いたWestern blot法及び間接蛍光抗体法により、Pvs48及びPvs47がいずれも約50kDaの蛋白として生殖母体表面に特異的に発現していることが確認された。またこれらの抗血清は、非還元条件下ではより強く原虫蛋白を認識し、明らかに移動度の異なる二種の蛋白をそれぞれ認識していた。以上の結果より、DNA免疫法を用いることにより、システインに富むPvs48及びPvs47のいずれの立体構造も認識できる特異抗体が作成できることが判明した。またこれらの結果は、1993年から現在まで、いかなる組換え蛋白を用いても特異抗体を作成できなかった熱帯熱マラリア原虫伝搬阻止ワクチン候補抗原Pfs48の研究にも応用しうる有用な知見と考えられた。2.Pvs47及びPvs48の遺伝子多型の解析タイ、バヌアツ、コロンビアのマラリア流行地において得られた三日熱マラリア原虫感染患者血液からDNAを抽出した。それらからPCR法を用いてPvs47及びPvs48遺伝子の全長を増幅し、遺伝子多型の解析を行った。その結果、23分離株の解析から、Pvs47では3カ所の同義置換、15カ所の非同義置換が認められ、非同義置換は前半部の6Cys-2Cysの部分に集中していた。Pvs48では4カ所の同義置換、7カ所の非同義置換が認められ、非同義置換はC末端に近い6Cysの部分に比較的多数認められた。また、Pfs48で報告されているのと同様、多型に地域的偏りが認められた。今後、これらの多型がワクチンとしての免疫原性に及ぼす影響について検討することも、重要な研究課題と考えられる。

1. DNA Immunization Method for the Preparation of Specific Antisera Against Pvs47 and Pvs48, and the Induction of Antibodies Against Pvs47 and Pvs48 by Injection The results showed that the antiserum against Pvs48 and Pvs47 contained a protein of about 50kDa, which was identified by Western blot and indirect fluorescent antibody. The antiserum is highly resistant to protozoan proteins under non-reactive conditions, and the two proteins are highly resistant to protozoan proteins under reactive conditions. The above results show that DNA immunization method is used to identify the three dimensional structure of Pvs48 and Pvs47. In 1993, the results of this study were as follows: (1) The use of specific antibodies against Pfs48 as a candidate antigen was studied. 2. Analysis of Pvs47 and Pvs48 gene polymorphism, DNA extraction from blood of patients infected with Pvs47 and Pvs48 The PCR method was used to analyze the length of Pvs47 and Pvs48 genes. The results showed that 23 isolates were analyzed, Pvs47 was replaced by synonymous substitution, 15 was replaced by nonsynonymous substitution, and 6Cys-2Cys in the first half of nonsynonymous substitution were concentrated. Pvs48 4 Pfs48 is reported to be the same type and multi-type of geographical bias. In the future, the study of the immunogenicity and influence of polytypes will be an important research topic.

项目成果

Tsuboi T.et al.: "Transmission-blocking vaccine of vivax malaria."Parasitology International. 52. 1-11 (2003)

Tsuboi T.等人：“间日疟疾的传播阻断疫苗”。国际寄生虫学。

Kaneko O.et al.: "Gene structure and expression of a Plasmodium falciparum 220-kilodalton protein homologous to the Plasmodium vivax reticulocyte binding proteins"Molecular and Biochemical Parasitology. 121. 275-278 (2002)

Kaneko O.等人：“与间日疟原虫网织红细胞结合蛋白同源的恶性疟原虫 220 千道尔顿蛋白的基因结构和表达”分子和生化寄生虫学。

Tachibana M.et al.: "Two types of Plasmodium ovale defined by SSU rRNA have distinct sequences for ookinete surface proteins"Molecular and Biochemical Parasitology. 122. 223-226 (2002)

Tachibana M.等人：“由 SSU rRNA 定义的两种类型的卵形疟原虫具有不同的动动表面蛋白序列”《分子和生化寄生虫学》。