マラリア原虫の伝搬阻止に関与する2種の抗原遺伝子のクローニング

克隆两个参与阻断疟疾寄生虫传播的抗原基因

• 批准号: 08670278
• 负责人: 坪井 敬文
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670278/
• 关键词: マラリア; オ-キネート; 伝搬阻止; ワクチン; 遺伝子クローニング

申請者らは、ネズミマラリア原虫(Plasmodium yoelii)オ-キネート表面の分子量22kD(Pys22)又は28kD(Pys28)の蛋白の一次構造を明らかにすることを目的として本研究を実施した。P. yoelii gametocyteをオ-キネート培養培地(Munderloh & Kutti,1987)を用いて培養し、この虫体から抽出したmRNAを用いてcDNAライブラリを作成した。次に塩基配列のデータベースを用いて、現在までに判明している全てのオ-キネート表面蛋白の一次構造の間で保存的な領域を同定し、その部位の塩基配列をもとに新たなネズミマラリア原虫オ-キネート表面蛋白遺伝子を同定するための、縮重したオリゴヌクレオチドPCRプライマーを合成した。上記cDNAライブラリを鋳型として、このプライマーを用いてPCRを行ったところ、予想されたサイズのDNAフラグメントが増幅された。そこでこのPCR産物をプラスミドにクローニングした後ジデオキシ法にて塩基配列を決定した。得られた塩基配列の解析から、2種類のクローンが存在することが明らかとなり、その塩基配列から類推されるアミノ酸配列を国立遺伝学研究所のデータベースを用いて比較すると、その内の1種はP.bergheiにおいて報告されたPbs21とは7割、P.gallinaceumのPgs25、Pgs28及びP.falciparumのPfs25とは4割の配列が一致していた。中でも上皮細胞増殖因子様の配列であるシステイン残基の数及び位置はPbs21及びPgs28のそれと完全に一致しており、Pgs25、Pfs25より2残基少なかったがその位置は同一であった。またもう1種のクローンのシステインの数及び位置はPfs25及びPgs25と完全に一致していた。以上の結果から、これらの遺伝子はマラリア原虫オ-キネート表面蛋白に特異的なものと考えられた。

Applicants ら は, ネ ズ ミ マ ラ リ ア parasite, Plasmodium yoelii) オ - キ ネ ー ト surface の 22 kd molecular weight (Pys22) and は 28 kd protein (Pys28) の の a tectonic を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て を this research be applied し た. P. yoelii gametocyte を オ - キ ネ ー ト cultivate the petty (Munderloh & Kutti, 1987) を い て し, こ の worm か ら spare し た mRNA を with い て cDNA ラ イ ブ ラ リ を made し た. Time に salt base with column の デ ー タ ベ ー ス を with い ま て, now で に.at し て い る full て の オ - キ ネ ー ト surface protein の で saved between a tectonic の を な field with し, そ の parts の salt base with column を も と に new た な ネ ズ ミ マ ラ リ ア parasite オ - キ ネ ー ト surface protein heritage 伝 son を be す る た め の, shrinkage し た オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ Youdaoplaceholder0 PCRプラ プラ た プラ を を を を synthesis た た. Written cDNA ラ イ ブ ラ リ を type where と し て, こ の プ ラ イ マ ー を with い PCR line を っ て た と こ ろ, to want to さ れ た サ イ ズ の DNA フ ラ グ メ ン ト が rights of さ れ た. そ こ で こ を の PCR products プ ラ ス ミ ド に ク ロ ー ニ ン グ し た after ジ デ オ キ シ method に て salt base with column を decided し た. Have ら れ た salt base with column の parsing か ら, 2 species の ク ロ ー ン が exist す る こ と が Ming ら か と な り, そ の salt base with column か ら analogy さ れ る ア ミ ノ acid with column を national heritage 伝 learning institute の デ ー タ ベ ー ス を with い て compare す る と, そ の の within one は P.b erghei に お い て report さ れ た Pbs21 と は 7 cut, P.g allinaceum <s:1> Pgs25, Pgs28 and び p. falciparum <s:1> Pfs25と <s:1> 4-cut <e:1> configuration が consistent <s:1> て た た た た た. Others in で も epithelial cells raised colonization factors の match column で あ る シ ス テ イ ン residues の number and び position は Pbs21 and び Pgs28 の そ れ と に completely consistent し て お り, Pgs25, Pfs25 よ り 2 less residue な か っ た が そ の position は same で あ っ た. 1 ま た も う の ク ロ ー ン の シ ス テ イ ン の number and び position は Pfs25 and び Pgs25 と に completely consistent し て い た. の above results か ら, こ れ ら の heritage 伝 son は マ ラ リ ア parasite オ - キ ネ ー ト surface protein に specific な も の と exam え ら れ た.

项目成果

Takafumi Tsuboi et al.: "Primary structure of a novelookinete surface protein from Plasmodium berghei" Molecular and Biochemical Parasitology. (発表予定). (1997)

Takafumi Tsuboi 等人：“伯氏疟原虫新型动蛋白表面蛋白的主要结构”《分子与生化寄生虫学》（即将出版）。