新規三日熱マラリア伝搬阻止ワクチン候補抗原の同定

鉴定一种新型疫苗候选抗原以阻止间日疟原虫疟疾的传播

• 批准号: 13226087
• 负责人: 坪井 敬文
• 金额: --
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226087/
• 关键词: 三日熱マラリア; 伝搬阻止ワクチン; 生殖母体; 遺伝子クローニング; 国際研究者交流; タイ

新たな三日熱マラリア伝搬阻止ワクチン抗原を同定するため、本年度は生殖母体表面蛋白の遺伝子クローニングを行った。熱帯熱マラリア原虫生殖母体表面蛋白であるPfs48のアミノ酸配列を用いて三日熱マラリア原虫ゲノムシーケンスデータベースをBLAST検索した。その結果、アミノ酸配列でPfs48と比較的相同性の高い2つの短いDNA断片が得られた。この情報を基に、三日熱マラリア原虫実験室内株からPCRによりpvs48遺伝子の全長を増幅した。またpvs48の近傍を探索した結果、熱帯熱マラリア原虫で報告されたのと同様pvs48の約3kb上流にpvs47と思われる遺伝子が見出された。タイ国内のマラリア流行地において三日熱マラリア患者の同意を得た後採血し、分離精製した生殖母体からRNAを抽出した。また、同一患者血液から赤内型原虫を分離した後in vitro培養したオーキネートを作成し、それぞれからもRNAを抽出した。それらを用いてRT-PCRを行いpvs47の転写を確認した。その結果、Pvs47は生殖母体のステージにのみ転写されており、早期の有性生殖ステージ原虫に特異的と考えられた。またこのcDNAをクローン化した後塩基配列を解析した結果、pvs47の遺伝子はイントロンを含んでいないことが判明した。Pvs47の塩基配列から予想される433残基のアミノ酸配列の特徴としては、N末端にシグナル配列を持ち、C末端にはGPIアンカーと思われる短い疎水性領域が存在していた。またそれらの間には、システインに富む領域が存在し、Pfs47との構造比較から6個の保存的なシステインが存在する「6-Cys Domain」、2個の保存的なシステインが存在する「2-Cys Domain」、6個の保存的なシステインが存在する「6-Cys Domain」で構成されていた。これらの構造は、マラリア原虫に特異的な構造であった。

New たな三日热マラリア伝出blocked ワクチングを同定するため, and this year's reproductive maternal surface protein の伝子クローニングを行った. Thermal malaria protozoa gonocyte surface protein Pfs48 acid complex is used.て三日热マラリアprotozoa ゲノムシーケンスデータベースをBLAST検SOした.その results, アミノ acid arrangement and でPfs48 and the similarity of the comparison の高い2 and つの short いDNA fragment が got られた.このinformationをbasedに,三日热マラリア protozoa 実験 indoor strain からPCR によりpvs48 缝子の全length を Increased width した.またpvs48のNearlyをExplorationしたResults、热帯热マラリアprotozoa でreportされたのとSame as 様pvs48のabout 3kb high stream にpvs47と思われる伝子が见出された. The patient's consent for the three-day fever malaria epidemic in Japan was obtained after blood collection, isolation and purification of reproductive maternal RNA, and extraction.また, the same patient's blood was isolated and cultured in vitro, and the RNA was extracted and extracted.それらを Use いてRT-PCR を行いpvs47の転 to write をconfirm した. The result of その, Pvs47は reproductive mother body のステージにのみ転WRITE されており, early のsexual reproduction ステージ protozoa にspecific と考えられた.またこのcDNA をクローンしたAfter the base arrangement をanalysis した results, pvs47の缝子はイントロンを槓でいないことが见明した. Pvs47の塩婩array から yu want to される433 residue のアミノacid ligation の特徴としては, N-terminal にThe シグナル arrangement をhold ち, C-terminal にはGPI アンカーと思われるshort い疎 Water-based domain がexistence していた.またそれらの间には, システインに富む区がexistentし, Pfs47とのstructure comparison から6 の saved なシステインがexistent する『6-Cys Domain", 2 saved なシステインが exist and する"2-Cys Domain", 6 saved なシステインが exist and する"6-Cys Domain" constitutes されていた. The structure of the これらのは, the structure of the malaria protozoa that is specific to the であった.