病原細菌のタイプIII分泌装置の機能とその超微形態学的解析

病原菌Ⅲ型分泌器的功能及超形态分析

• 批准号: 14021109
• 负责人: 阿部 章夫
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021109/
• 关键词: 腸管病原性大腸菌; タイプIII分泌装置; 超微形態学的解析; Esp

グラム陰性病原細菌の多くはタイプIII分泌装置を介してエフェクターと呼ばれる機能性タンパク質を宿主細胞内に移行させる。宿主に移行したエフェクターは、様々な宿主側因子に作用することで感染成立に重要な役割を果たす。本研究の目的は、腸管病原性大腸菌(enteropathogenic E.coli, EPEC)が保持するタイプIII分泌装置の超微形態学的解析、および構成タンパク質の局在と機能を調べ、タイプIII分泌装置を介したエフェクターの宿主移行システムの全体像を明らかにすることである。タイプIII分泌装置に関与すると考えられるEscC、EscD、EscJの欠損株をそれぞれ作製し、各欠損株におけるタイプIII分泌タンパク質の培地中への分泌をCBB染色及び抗Tir抗体等を用いたウエスタンブロット法で解析した。その結果、欠損株ではタイプIII分泌タンパク質の菌体外へ分泌は認められなかった。また、上記欠損株よりタイプIII分泌装置の精製を試み、透過型電子顕微鏡で解析したが、欠損株ではタイプIII分泌装置を確認することができなかった。このことから、EscC、EscD、EscJはタイプIII分泌装置を直接構成するタンパク質であることが示唆された。さらに抗EscC抗体を用いた免疫電顕により、EscCはタイプIII分泌装置の外膜リングを構成することが示唆された。申請者らは前年度の特定領域研究にて、EspA鞘状構造が付随したタイプIII分泌装置の高次構造を明らかにしたが、今年度の研究で分泌装置基部の外膜リングを構成するタンパク質を同定した。今後は内膜リングのタンパク質を同定するとともに、GSTプルダウン法によって個々の構成タンパク質の相互作用を明らかにする。

The host cell is the host cell of a multiple-protein secretion apparatus of a negative pathogen. Host migration, host-side factors, and infection are important factors. The purpose of this study was to elucidate the ultramorphological characteristics of enteropathogenic E.coli (EPEC) secretory apparatus, the functional modulation of its components, and the overall imaging of host migration system. EscC, EscD and EscJ were analyzed by CBB staining and anti-Tir antibody. The result of the disease is that the plant is deficient in secretion. The purification of the secretion device of the defective plant was tested and analyzed by transmission electron microscope. EscC, EscD and EscJ are the direct components of the secretion device. Anti-EscC antibodies are used in the immune system, and EscC is secreted in the outer membrane. The applicant's research on the specific field of the previous year, the sheath structure of the EspA, the high-order structure of the secretion device, and the outer membrane structure of the secretion device base of the current year were determined. In the future, the interaction between the two substances will be clarified by GST method.

项目成果

Sekiya K: "The ClpXP ATP-dependent protease regulates flagellum synthesis in Salmonella enterica serovar typhimurium"Journal of Bacteriology. 184(3). 645-653 (2002)

Sekiya K：“ClpXP ATP 依赖性蛋白酶调节鼠伤寒沙门氏菌中的鞭毛合成”细菌学杂志。

阿部 章夫: "病原細菌のタイプIII分泌装置を標的とした阻害剤の探索系の確立"The Japanese Journal of Antibiotics. 55(3). 331-336 (2002)

Akio Abe：“建立针对病原菌 III 型分泌装置的抑制剂搜索系统”，《日本抗生素杂志》55(3) (2002)。

阿部 章夫: "腸管病原性大腸菌のタイプIII分泌装置を介した付着のメカニズム"細胞工学. 21(2). 157-161 (2002)

Akio Abe：“致病性大肠杆菌的 III 型分泌装置的粘附机制”细胞工程 21(2) 157-161 (2002)。

阿部 章夫: "エフェクターの分泌と宿主細胞への移行"Helicobacter Research. 7(1). 12-17 (2003)

Akio Abe：“效应子的分泌和向宿主细胞的转移”Helicobacter Research 7(1) (2003)。