プロテオミクス法によるDNA損傷誘発ヒストンH2AXタンパク質複合体の機能解析

蛋白质组学方法分析DNA损伤诱导的组蛋白H2AX蛋白复合物的功能

• 批准号: 14026035
• 负责人: 井倉 毅
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026035/
• 关键词: DNA二重鎖切断; ヒストンH2AX; Tip60ヒストンアセチル化酵素; DNA修復; クロマチン; タンパク質複合体; MS解析

DNA二重鎖切断が生じた時、クロマチンの構成タンパク質、ヒストンH2AのvariantであるH2AXのC末の139番目のセリン残基が特異的にリン酸化されることがすでに知られている。この事実をもとにクロマチンDNA損傷修復のメカニズムを明らかにするために,ヒストンH2AXをHeLa細胞より精製し,解析を行った。その結果,ヒストンH2AXは複合体を形成することが明らかになった。MS解析およびウエスタンブロット法によりその複合体にはヒストンアセチル化酵素,ユビキチン関連因子などが含まれていることが明らかになり,また実際にヒストンH2AX複合体にヒストンアセチル化酵素活性が存在することを生化学的にも検証した。これらの事実によりH2AXの修飾はリン酸化のみならず,アセチル化,ユビキチン化などの修飾がなされることが示された。またTIP60のヒストンアセチル化酵素活性とH2AXのリン酸化との関わりをヒストンアセチル化酵素活性を欠失させたTIP60変異体のHeLa安定形質株を用いて検討した結果、γ線照射でのDNA損傷時においてこの変異株でのH2AXのリン酸化状態が正常HeLa細胞と比較して有意に抑制されることが示され,DNA損傷時にH2AXがリン酸化されるためにはTIP60のアセチル化活性が必要であるということが明らかになった。

DNA double-lock cleavage occurs when, among other things, the constituent residues of H2A, H2AX and C terminal residues, H2AX and C terminal residues, H2AX and C terminal residues of H This is the first time that H2AX cells have been purified and analyzed. As a result, the H2AX complex was formed. MS analysis of H2AX complex, H2AX complex. The H2AX modification is a modification of the H2AX modification. The results of the study on DNA damage induced by gamma ray irradiation in HeLa cells and H2AX in HeLa cells showed that H2AX in HeLa cells was inhibited intentionally. When DNA damage occurs, H2AX is released and the activity of TIP60 is released.

项目成果

井倉毅: "Chromatin dynamics and DNA repair"Frontiers in Bioscience. 8. 149-155 (2003)

Takeshi Ikura：“染色质动力学和 DNA 修复”生物科学前沿 8. 149-155 (2003)。