ヒトAuroraおよび細胞分裂関連蛋白質の機能解析

人类 Aurora 和细胞分裂相关蛋白的功能分析

• 批准号: 14028027
• 负责人: 岡野 幸雄
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028027/
• 关键词: Aurora kinase family; Cell division; Centrosome; dominant negative; transcription; CDE-CHR; HisotoneH3; Cdc2-cyclinB

HeLa細胞において、ドミナントネガティブAurora-AをGFPとの融合タンパク質として過剰発現し、細胞分裂への影響を観察した。その結果、ドミナントネガティブAurora-Aの過剰発現によって中心体の数に異常がみられ、紡錘体が正常に形成されない細胞が多数観察された。また間期細胞では多核細胞が高頻度で観察された。この多核細胞は、異常な細胞分裂の結果形成されたと考えられた。HistoneH3のSer10のリン酸化は細胞分裂期の染色体凝縮において重要であると考えられているが、ヒトAurora-A,-B,-Cとこのリン酸化の関係について検討した。両者を大腸菌で発現させて、Aurora-A及びAurora-BがHistoneH3のSer10をin vitroでリン酸化することを示し、染色体凝縮に関与する可能性が示唆された。また、熊本大学との共同研究によって、cdc2,PP1との関連を検討した。CDC2-cyclin-BがPP1を阻害することによって、Aurora-Aの活性化を行うという結果を得ている。Aurora-Bは、M期にRNAの蓄積、がん細胞における過剰発現がみられるが、その調節機構については明らかにされておらず、Aurora-Bの転写制御機構について解析した(浜松医大との共同研究)。PCR法によってAurora-B遺伝子の5'近傍領域をクローニングし、プライマーエクステンションによって転写開始点を決定した。また、ルシフェラーゼ法によって、転写活性を検討した。その結果、G1/S期と比較して、G2/M期では3倍程度の転写活性化がみられるが、CDE-CHR配列の変異によって、G1/S期の転写活性が、G2/M期程度まで上昇した。さらに、CDE-CHR配列へのE2F, DPの結合についても検討中である。

HeLa cell において、ドミナントネガティブAurora-AをGF Pとのfusion is the quality of the material, and the cell division is affected by the phenomenon.そのRESULTS、ドミナントネガティブAurora-Aのpass剰発现によってcenter The number of the body is abnormal, the spindle is normal, and the cells are mostly formed. Interphase cells and multinucleated cells are frequently detected. Multinucleated cells are formed as a result of abnormal cell division and abnormal cell division. HistoneH3's Ser10's acidification and chromosome condensation during cell division are important.えられているが、ヒトAurora-A,-B,-Cとこのリンacidified のrelations について検曰した. These are coliform bacteria, Aurora-A and Aurora-B, Histone H3 Ser10 In vitro acidification test, chromosome condensation test and possibility test.また and Kumamoto University との jointly researched によって, cdc2, PP1 and PP1 related research. CDC2-cyclin-B is blocked and activated, and Aurora-A is activated and the results are obtained. Aurora-B は, M-phase にRNA accumulation, がん cell におけるpassing 剰発appear がみられるが, そのregulatory mechanism については明らかにされておらず、Aurora-Bの転control organization についてanalyticsした (joint research with Hamamatsu Medical University). PCR method によってAurora-B 伝子の5'near area をクローニングし, プライマーエクステンションによって転write the starting point and decide the した.また, ルシフェラーゼ法によって, 転WRITING ACTIVE を検した. Result, G1/S phase comparison, G2/M phase 3-fold activation, C DE-CHR has a different structure, a higher activity in the G1/S phase, and an increased level in the G2/M phase.さらに、CDE-CHR arrangement へのE2F, DPのcombination についても検同中である.

项目成果

Obora A: "Synergisitc induction of apotosis by acyclic retinoid and interferon-β in human hepatocellular carcinoma cells"Hepatology. 36. 1115-1124 (2002)

Obora A：“无环类维生素A和干扰素-β在人肝细胞癌细胞中协同诱导细胞凋亡”《肝病学》36。1115-1124（2002）

Crosio C: "Mitotic phosphorylation of histone H3: Spatio-temporal regulation by mammalian aurora kinase"Mol Cell Biol. 22. 874-885 (2002)

Crosio C：“组蛋白 H3 的有丝分裂磷酸化：哺乳动物极光激酶的时空调节”Mol Cell Biol。

Marumoto T.: "Roles of aurora-A kinase in mitotic entry and G2 checkpoint in mammalian cells"Genes to Cells. 7. 1173-1182 (2002)

Marumoto T.：“极光 A 激酶在哺乳动物细胞有丝分裂进入和 G2 检查点中的作用”《基因到细胞》。

Adachi S: "Phosphorylation of retinoid X receptor suppresses its ubiquitination in human hepatocellular caricinoma"Hepatology. 35. 332-340 (2002)

Adachi S：“类视黄醇 X 受体的磷酸化抑制其在人肝细胞癌中的泛素化”肝病学。