活性化変異c-Kit、Flt3の異常シグナル伝達を標的とした治療法の開発

针对激活突变 c-Kit 和 Flt3 的异常信号传导的治疗方法的开发

• 批准号: 14030050
• 负责人: 水木 満佐央
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030050/
• 关键词: receptor tyrosine kinase; targeting therapy; acute myeloid leukemia; mutation; chemotaxis; STAT

1.Kit, Flt3シグナル伝達に関与する細胞内ドメインチロシン残基の検討:細胞質内各Tyr残基のPheに置換にて野生型c-Kitにおいては増殖・生存は影響を受けなかったがTyr567,569,719のPhe置換にて細胞遊走が著明に阻害された。Tyr567からsrc family kinase, p38MAP kinaseの活性化,Ca2+ influx, Erk1/2の活性化に到るシグナル及びTyr719からPI3-Kinaseの活性化、Ca2+influxの誘導に到るシグナルの両経路が協調しながら細胞遊走をもたらしていることを明らかにし、SCF/c-Kitを介した腫瘍浸潤へのこれらのシグナルの関与が考慮された。一方、Tyr719/PI3-Kinaseはc-Kitキナーゼ変異型でのキナーゼ活性に重要である知見を得ていたが、Flt3キナーゼ領域変異型では同領域のtyr残基およびPI3-Kinaseの会合ともキナーゼ活性に関連しないことを新たに見い出した。2.活性化変異c-Kitレセプター特異的阻害療法の開発:STI571,AG1296,SU5614などのチロシンキナーゼ阻害剤が膜直下型変異c-Kitには有効であるが、キナーゼ領域型には単独、併用にても全く無効で、PP1のみが部分的に有効であることを見い出した。3.活性化変異c-Kit, Flt3特異的標的遺伝子の解析:Flt3-ITDを用いたmicrochip解析にて特異的発現が認められたSTAT3/5の標的遺伝子の発現が、c-Kit変異型においても認められ、活性化変異レセプターチロシンキナーゼの腫瘍性シグナルがSTAT3/5を共通としていることを見い出した。またその標的遺伝子の一つであるpim-2はAML症例において高発現しており今後の分子標的の対象と考えられた。

1. Kit, Flt3: Cytoplasmic Tyr Residue Substitution for Tyr Residues in Wild-type c-Kit: Cytoplasmic Tyr Substitution for Tyr567,569,719 Inhibits Cell Migration. Tyr567, src family kinase, p38MAP kinase activation, Ca2 + influx, Erk1/2 activation, and Tyr719, PI3-Kinase activation, Ca2 +influx induction, and cell migration coordination. SCF/c-Kit mediated tumor infiltration. Tyr719/PI3-Kinase is a c-Kit with different types of residues and different activities. 2. Development of specific blocking therapy for activated variant c-Kit:STI571,AG1296,SU5614. The blocking agent is directly under the membrane. The variant c-Kit is independent and combined. The PP1 part is effective. 3. Analysis of Flt3-ITD specific target gene: Flt3-ITD is used in microchip analysis, and specific expression of STAT3/5 target gene is recognized. c-Kit is used in heterogeneous expression, and activation of Flt3-ITD is used in common expression. A study of the molecular targets in AML cases.

项目成果

田中弘和: "E2F1 and c-Myc potentiate apoptosis through inhibition NF-κB that facilitates MnSOD-mediated ROS elimination"Molecular Cell. 9. 1017-1029 (2002)

Hirokazu Tanaka：“E2F1 和 c-Myc 通过抑制 NF-κB 促进细胞凋亡，促进 MnSOD 介导的 ROS 消除”《分子细胞》。

上田周二: "Critical roles of c-kit tyrosine residues 567 and 719 in stem cell cell factor-induced chemotaxis : contribution of src family kinase and PI3-kinase on calcium mobilization and cell migration"Blood. 99. 3342-3349 (2002)

Shuji Ueda：“c-kit 酪氨酸残基 567 和 719 在干细胞细胞因子诱导的趋化性中的关键作用：src 家族激酶和 PI3-激酶对钙动员和细胞迁移的贡献”Blood. 99. 3342-3349 (2002)

橋本光司: "Necessity of tyrosine 719 and phosphatidylinositol 3'-kinase-mediated signal pathway in constitutive activation and oncogenic potential of c-kit receptor tyrosine kinase with the D814V mutation"Blood. 101. 1094-1102 (2003)

Koji Hashimoto：“酪氨酸 719 和磷脂酰肌醇 3-激酶介导的信号通路在具有 D814V 突变的 c-kit 受体酪氨酸激酶的组成性激活和致癌潜力中的必要性”Blood。

水木満佐央: "Suppression of myeloid transcription factors and induction of STAT response genes by AML-specific Flt3 mutations"Blood. (印刷中). (2003)

Masao Mizuki：“AML 特异性 Flt3 突变对骨髓转录因子的抑制和 STAT 反应基因的诱导”（出版中）。

園山順子: "Functional cooperation among Ras, STAT5 and PI3-K is required for full oncogenic activities of BCR/ABL in K562 cells"J. Biol. Chem. 277. 8076-8082 (2002)

Junko Sonoyama：“K562 细胞中 BCR/ABL 的完整致癌活性需要 Ras、STAT5 和 PI3-K 之间的功能配合”J. Biol。