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細胞膜通過性ペプチドによるp53標的蛋白導入法および蛋白置換療法の開発

开发p53靶蛋白导入方法和使用细胞膜穿透肽的蛋白质替代疗法

基本信息

批准号：
14030055
负责人：
富澤一仁
金额：
$ 3.52万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030055/
关键词：
p53 遺伝子治療蛋白セラピー癌口腔癌

项目摘要

本研究により,以下のことを実施し,明らかにした。1)11個のポリアルギニンをコードするcDNAをp53cDNAに付加し,発現ベクターに組み込んだ。2)1)で作製したプラスミドを,大腸菌にトランスフォームし,11R-p53蛋白の発現に成功した。3)大腸菌で発現させた11R-p53をニッケルカラム等で精製し,同精製蛋白を口腔癌患者由来でp53遺伝子の変異が認められるNOS-1細胞に導入した。11R-p53は,効率よく同細胞に導入されることが確認された。4)NOS-1細胞に導入された11R-p53蛋白の局在について,蛍光免疫染色法にて検討したところ,核内に導入されることが確認された。5)11R-p53の口腔癌細胞増殖抑制効果について検討するため,口腔癌患者から樹立した4種類の癌細胞に11R-p53を導入し,その増殖抑制効果についてWSTアッセイにて検討した。11R-p53は,有意にすべての癌細胞において,その増殖を抑制した。また,その増殖抑制効果は,既存のアデノウイルスを利用した遺伝子導入法と同程度であった。6)また,11R-p53には,シスプラチンによる癌細胞アポトーシス誘導作用を有意に促進した。以上の結果より,ポリアルギニンを利用したp53直接蛋白導入法が,新しい癌治療法として有用であることが確認された。

This study is based on the following principles: 1)11 cDNA fragments were added to the p53cDNA fragment, and the fragment was found to be composed of two fragments. 2)1) The expression of 11R-p53 protein in E. coli was successful. 3)Escherichia coli was found in 11R-p53 cells and purified, and the same purified protein was introduced into NOS-1 cells. 11R-p53 was introduced into the same cells and confirmed. 4)NOS-1 cells were transfected with 11R-p53 protein, which was detected by light immunostaining and confirmed by nuclear transfection. 5) 11R-p53 was introduced into four types of oral cancer cells in patients with oral cancer. 11R-p53 is intended to inhibit the proliferation of cancer cells. To the same extent, the method of gene introduction is used to prevent the proliferation of genes. 6) 11R-p53 intentionally promotes the induction of cancer cell apoptosis. The above results were confirmed by p53 direct protein introduction.