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ＨＮＦ４αタンパク質導入によるｉＰＳ細胞から膵β細胞分化誘導技術開発

开发导入HNF4α蛋白诱导iPS细胞分化为胰腺β细胞的技术

基本信息

批准号：
15F15110
负责人：
富澤一仁
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-24 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15F15110/
关键词：
糖尿病 HNF4α 蛋白質導入法再生医療 iPS細胞分化誘導組換え蛋白質

项目摘要

本研究は、膵β細胞は分化後成熟する過程があり、その成熟を制御（促進）する因子がHNF4aではないかとの仮説を立て、膵臓b細胞分化誘導法の後期にHNF4aを導入することによりグルコース応答性にインスリンを分泌する細胞を作製できるか、また作製できたらその詳細な機構を明らかにすることを目的として研究を実施した。まず、HNF4a組換えタンパク質がマウス細胞内に導入されるか検討した。その結果、マウスES細胞の培地に添加1時間後には、細胞内に導入されることが明らかになった。導入されたHNF4αタンパク質の細胞内局在について検討したところ、同タンパク質は、核と細胞質に存在することが確認できた。次に、同蛋白質の膵β細胞誘導性について検討した。Medium 1に添加するか、あるいはMedium１～3のすべての培地に添加した時が、Pdx1およびインスリンの発現が最も高かった。Pdx1陽性細胞が約25％で、インスリン陽性細胞は約８％であった。HNF4a組換えタンパク質を添加しないと、インスリン陽性細胞は１％未満であることから、HNF4a組換えタンパク質を導入することにより、膵β細胞への分化誘導が促進されることが明らかになった。さらに、マウスES細胞から分化誘導した細胞をストレプトゾトシン投与により作製したⅠ型糖尿病モデルマウスの腎皮膜下に移植した。移植後経時的に空腹時血糖ならびに血中インスリン濃度を測定し、移植細胞のインスリン分泌効果について検討した。しかし、空腹時血糖はコントロールの細胞移植をしていないマウスと同程度であった。移植した細胞の抗インスリン抗体で免疫染色をすると、インスリン陽性であった。このことから、In vivoで効果を発揮するには、さらに多くの細胞を移植する必要があると結論づけた。

The aim of this study is to investigate the mechanism of HNF4a in the process of post-differentiation maturation and its regulation (promotion). HNF-4a gene is introduced into the cell. The result is that the ES cells are cultured for 1 hour and then introduced into the cells. The introduction of HNF4 α into the cytoplasm of the cell was confirmed by the presence of HNF4 α in the cytoplasm and nucleus. Next, the same protein and β-cell inductivity were investigated. Medium 1 is the highest when added to Medium1~3. Pdx1 positive cells accounted for about 25%, while Pdx 1 positive cells accounted for about 8%. HNF4a group of cells were induced to differentiate into beta cells by addition of HNF4a group of cells. In addition, ES cells were induced to differentiate and transplanted under the kidney to control type I diabetes. Fasting blood glucose and serum concentrations were measured after transplantation, and the secretion of serum by transplanted cells was examined. The blood sugar level in the fasting state is higher than that in the normal state. Anti-tumor antibody staining In vivo, it is necessary to transplant cells.