CDC25phosphataseを標的とした消化器癌の治療

CDC25磷酸酶靶向治疗胃肠癌

• 批准号: 14030053
• 负责人: 山本 浩文
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030053/
• 关键词: CDC25 phosphatase; 消化器癌; アデノウイルス; Antisense; Cre-LoxP

癌遺伝子CDC25 phosphataseの癌における発現と機能的役割を明らかにし,CDC25を分子標的とした治療法の開発が目的である。方法と結果(1)すでに食道癌,大腸癌についてCDC25の発現は報告済みである(Brit J Cancer,2001,Cancer Res,2000)。本年度は、CDC25Aの肝癌における知見を論文にまとめた。(2)293細胞を用いてCDC25 virus液を段階的に増幅してゆき濃縮していったが、最終的に僅かなvirusしか精製できなかった。VirusのDNAからは、CDC25Bの組込みが確認されたので、293細胞がCDC25Bの遺伝子操作によりtoxicな影響がでて十分なvirusが産生できない可能性が考えられた。そこで、Cre-LoxPシステムを用いて、CDC25B cDNAの後にstufferをつけたsilent virusと、CAG promoter誘導下にCreを発現するvirus液を別々に用意し、標的癌細胞に共感染させるシステムに変更することにした。これにより、Creがstufferを切り出され、CDC25Bの外来性の遺伝子発現が実現される。(3)CDC25AのAntisense oligoをCD25A mRNAの翻訳開始部位を含んで少し手前の配列から数種類antisense oligoを設計し、うちひとつの配列(18mer)がCDC25Aの発現を特異的に抑制することを確認した。このOligoを用いて肝癌細胞株の強い増殖抑制を認めた。考察と問題点 現在までにCDC25Aの機能解析についてはoligoを用いてのantisense系を確立した。一方、CDC25Bのantisense, sense発現系はCre-LoxPによる共感染法に切り替え、ようやく実験系が機能しつつある。

The function of CDC25 phosphatase in the development of cancer is becoming more and more obvious, and the development of CDC25 molecular targets is becoming more and more important. Methods Results (1) The development of CDC25 in esophageal and colorectal cancer was reported (Brit J Cancer,2001,Cancer Res,2000). This year, CDC 25A has been published. (2)293 cells were treated with CDC25 virus solution at different levels, and finally purified with CDC25 virus. Virus DNA detection, CDC25B group identification, CDC293 cells, CDC25B gene manipulation, toxic effects, virus generation, possibility of detection. For example, Cre-Lox P gene expression, CDC25B cDNA post-stuffer, silent virus, CAG promoter induced Cre virus expression, and target cancer cell co-infection. Cre stuffer was cut off and the alien gene of CDC25B was discovered. (3) CDC25A Antisense oligo CD25A mRNA translation start site contains a small number of different kinds of antisense oligo before the design, the selection and alignment (18mer) CDC25A expression and specific inhibition. Oligo is used to inhibit the proliferation of hepatocellular carcinoma cell lines. The analysis of CDC 25A's function and the application of oligo are discussed. One side, CDC 25B antisense, sense development system Cre-Lox P

项目成果

Xundi Xu, Hirofumi Yamamoto: "Overexpression of CDC25A Phosphatase is Associated with Hyper Growth Activity and Poor Prognosis of Human Hepatocellular Carcinomas"Clin Cancer Res. (in press). (2003)

Xundi Xu、Hirofumi Yamamoto：“CDC25A 磷酸酶的过度表达与人类肝细胞癌的过度生长活性和不良预后相关”Clin Cancer Res。