Cyclin D1を分子標的とした治療不能消化器癌に対する遺伝子治療研究

使用 Cyclin D1 作为分子靶标治疗无法治愈的胃肠道癌症的基因治疗研究

• 批准号: 12770684
• 负责人: 山本 浩文
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770684/
• 关键词: cyclin D1; 遺伝子治療; アデノウイルス; アンチセンス; 消化器癌; 大腸癌; 肝癌; アデノウィルス; アンチャンス; 食道癌

(目的)Antisense cyclin D1(CyD1)を用いた消化器癌遺伝子治療の臨床応用のためには,いろいろの遺伝子異常背景をもった多数の癌細胞株を用いた検定が必須である。(検討項目と結果)A.癌細胞のCyD1量,遺伝子異常背景についての検討大腸癌細胞株5種類,肝癌細胞株4種類について,RT-PCR法でCyD1 mRNA発現を,western blot法で蛋白量を検討した。またp53,K-raS, APC, beta-cateninの遺伝子背景について検討した。B.Adenovirus発現系の構築Simplified adenovirus transfer system(PNAS;95:2509-2514,1998)を用いて,感染により各種細胞株にantisense CyD1 mRNAを発現させる系を確立する。(進行状況)pcDNA3-CyD1plasmidより,CyD1cDNAを切り出し,adenovirus shattle vectorにantisense方向にsubcloningした。次に,adenovirus backbone vector(Easy1)とelectroporation法により特殊大腸菌の中で融合させ,recombinant AS CyD1 vectorを得た。同様に,遺伝子の組み込まれていないMock vector,およびGFPを発現するコントロールplasmid, FP+antisense CyD1を発現するplasmidの作製が完了した。さらに293細胞によってウイルス液を濃縮・精製して,生物学的効果判定の実験をすすめている。現在のところantisense CyD1は腫瘍の血管新生を抑制することがわかり、そのメカニズムを調べている。

(purpose) Antisense cyclin D1 (CyD1) を い た digesters traces of cancer therapy clinical 応 の 伝 child with の た め に は, い ろ い ろ の heritage 伝 child abnormal background を も っ た most を の cancer cells with い た 検 が set must be で あ る. Cancer cells (検 for project と results) a. の CyD1, heritage 伝 child abnormal background に つ い て の 検 for colorectal cancer cell lines 5 kinds, hepatocellular carcinoma cell line 4 kinds に つ い て, rt-pcr method で CyD1 mRNA 発 を now, western blot method を で protein quantity beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 p53,K-raS, APC, beta-catenin cultural heritage 伝 sub-background に て検 て検 て検 seek た. B. The development of adenovirus is to construct a Simplified adenovirus transfer system(PNAS; 95:2509-2514,1998)を infected with を て various cell lines にantisense CyD1 mRNAを showed させる lines を established する. (Progress status) pcdna3-cyd1 plasmidよ よ,CyD1cDNAを cut and developed,adenovirus shattle vectorにantisense direction にsubcloning た. Then に,adenovirus backbone vector(Easy1)とelectroporation method によ と で fusion させ in special escherichia coli <s:1>,recombinant AS CyD1 vectorを た. With others in に, but son 伝 の group み 込 ま れ て い な い Mock vector, お よ び GFP を 発 now す る コ ン ト ロ ー ル plasmid, FP + antisense CyD1 を 発 now す る plasmid の cropping が finished し た. Youdaoplaceholder0 293 cells によってウ によってウ ス ス ス solution を concentration and refinement <s:1> て, biological effect determination experimental をすすめて をすすめて る る. Now の と こ ろ antisense CyD1 は swollen sores の を angiogenesis inhibiting す る こ と が わ か り, そ の メ カ ニ ズ ム を adjustable べ て い る.

项目成果

Miyake Y, et.al: "Quantification of micrometastases in lymph nodes of colorectal cancer using real-time fluorescence polymerase chain reaction."Int J Oncol,. 16. 289-93 (2000)

Miyake Y 等人：“使用实时荧光聚合酶链反应对结直肠癌淋巴结中的微转移进行定量。”Int J Oncol，。

Miyake Y, Yamamoto H, et al.: "Extensive micrometastases to lymph nodes as a marker for rapid recurrence of colorectal cancer : a study of lymphatic mapping"Clin Cancer Res. 7. 1350-1357 (2001)

Miyake Y、Yamamoto H 等人：“淋巴结广泛微转移作为结直肠癌快速复发的标志：淋巴图谱研究”Clin Cancer Res。

Miyata H, et al: "Overexpression of CDC25B overrides radiation-induced G2/M arrest and results in increased apoptosis in esophageal cancer cells."Cancer Res,. (in press). (2001)

Miyata H 等人：“CDC25B 的过度表达会克服辐射诱导的 G2/M 期停滞，导致食管癌细胞凋亡增加。”Cancer Res，。

Takemasa I, et al: "Overexpression of CDC25B phosphatase as a novel marker of poor prognosis of human colorectal carcinoma."Cancer Res,. 60. 3043-50 (2000)

Takemasa I 等人：“CDC25B 磷酸酶的过度表达作为人类结直肠癌预后不良的新标志物。”Cancer Res，。

Ooka M, et.al: "Selection of mRNA markers for detection of lymph node micrometastases in breast cancer patients."Oncol Rep,. 7. 561-6 (2000)

Ooka M 等人：“选择用于检测乳腺癌患者淋巴结微转移的 mRNA 标记。”Oncol Rep，。