脳構造形成機構に関わるCNR分子群の機能と系統進化の解析

脑结构形成机制中CNR分子群的功能和系统进化分析

基本信息

批准号：
14034264
负责人：
先崎浩次
金额：
$ 4.35万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry (2003)Okazaki National Research Institutes (2002)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

(CNR1はβ1 Integrinを介した細胞接着活性能を有する)CNRはsynaptic Protocadherinファミリーに属する多様化した分子群であるが、その接着活性についてはほとんど知られていない。今回、HEK293T細胞に発現させたCNR1蛋白質の一部は細胞膜に存在し、Ca依存的細胞接着能を増加させることを見いだした。しかしながら、CNR1細胞外領域とヒト免疫グロブリンFc領域との融合蛋白質(CNR1 EC-Fc)を用いたin vitroでの強いホモフィリックな接着活性は認められなかった。さらに、CNR1を発現させていない、HEK293T細胞がCNR1EC1領域とヒト免疫グロブリンFc領域との融合蛋白質(CNR1 EC1[RGD]-Fc)との接着し、EC1内のRGD配列をポイントミューテーションによりRGEに変えた融合蛋白質CNR1 EC1[RGE]-Fcにおいては接着しなかったことより、接着性にEC1領域のRGD配列が関与することが明らかにされた。また、RGDSペプチドや抗β1 Integrin機能阻害抗体などのIntegrin分子機能阻害により、HEK293T細胞とCNR1 EC-Fcとの接着性は阻害される。また、CNR1を発現させたHEK293T細胞におけるCNR1蛋白質の局在と内在性のβ1 Integrin蛋白質の局在は一致し、さらに、シナプス発達過程にあるマウス小脳分子層におけるCNRとβ1 Integrinの局在様式は重なっている。以上の結果から、CNR1はβ1 Integrinとの間でヘテロフィリックなCa依存的な細胞接着活性を有することが明らかとなり、また、CNR-β1 Integrin相互作用による脳構造形成機構およびシナプス形成機構への関与が示唆される。

（CNR1具有通过β1整合素的粘附活性的能力）CNR是属于突触剂蛋白家族的一组各种分子，但对其粘附活性知之甚少。在本文中，我们发现在HEK293T细胞中表达的某些CNR1蛋白存在于细胞膜中，并提高了CA依赖性细胞粘附能力。然而，使用细胞外CNR1区域和人类免疫球蛋白FC区域之间的融合蛋白（CNR1 EC-FC）在体外没有观察到强的同质粘附活性。 Furthermore, HEK293T cells that do not express CNR1 adhered to the fusion protein (CNR1 EC1[RGD]-Fc) between the CNR1EC1 region and the human immunoglobulin Fc region, and did not adhere to the fusion protein CNR1 EC1[RGE]-Fc, in which the RGD sequence in EC1 was changed to RGE by point mutation, indicating that the EC1区域的RGD序列参与粘附。此外，抑制整合素分子功能，例如RGDS肽和抗β1整合素功能抑制抗体抑制HEK293T细胞和CNR1 EC-FC之间的粘附。此外，CNR1蛋白在CNR1表达HEK293T细胞中的定位与内源性β1整合蛋白蛋白的定位以及CNR和β1整联蛋白在小鼠小脑分子层中的定位模式相一致，这是在经历突触发育的情况下。以上结果表明，CNR1与β1整合素具有异余磷的CA依赖性细胞粘附活性，还建议其参与CNR-β1整合素相互作用的大脑结构形成机制和突触形成机制。