脳構造形成機構に関わるCNR分子群の機能と系統進化の解析

脑结构形成机制中CNR分子群的功能和系统进化分析

• 批准号: 14034264
• 负责人: 先崎 浩次
• 金额: $ 4.35万
• 依托单位: National Center of Neurology and Psychiatry (2003)Okazaki National Research Institutes (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14034264/
• 关键词: CNRカドヘリン; Integrin; 細胞接着活性能; 脳構造形成機構; カドヘリン; 系統進化

(CNR1はβ1 Integrinを介した細胞接着活性能を有する)CNRはsynaptic Protocadherinファミリーに属する多様化した分子群であるが、その接着活性についてはほとんど知られていない。今回、HEK293T細胞に発現させたCNR1蛋白質の一部は細胞膜に存在し、Ca依存的細胞接着能を増加させることを見いだした。しかしながら、CNR1細胞外領域とヒト免疫グロブリンFc領域との融合蛋白質(CNR1 EC-Fc)を用いたin vitroでの強いホモフィリックな接着活性は認められなかった。さらに、CNR1を発現させていない、HEK293T細胞がCNR1EC1領域とヒト免疫グロブリンFc領域との融合蛋白質(CNR1 EC1[RGD]-Fc)との接着し、EC1内のRGD配列をポイントミューテーションによりRGEに変えた融合蛋白質CNR1 EC1[RGE]-Fcにおいては接着しなかったことより、接着性にEC1領域のRGD配列が関与することが明らかにされた。また、RGDSペプチドや抗β1 Integrin機能阻害抗体などのIntegrin分子機能阻害により、HEK293T細胞とCNR1 EC-Fcとの接着性は阻害される。また、CNR1を発現させたHEK293T細胞におけるCNR1蛋白質の局在と内在性のβ1 Integrin蛋白質の局在は一致し、さらに、シナプス発達過程にあるマウス小脳分子層におけるCNRとβ1 Integrinの局在様式は重なっている。以上の結果から、CNR1はβ1 Integrinとの間でヘテロフィリックなCa依存的な細胞接着活性を有することが明らかとなり、また、CNR-β1 Integrin相互作用による脳構造形成機構およびシナプス形成機構への関与が示唆される。

(CNR1 CNR is a synaptic Protocadherin. It belongs to a diverse molecular population. Now, HEK293T cells show that part of CNR1 protein exists in the cell membrane, and Ca-dependent cells can be increased. CNR1 extracellular domain and Fc domain fusion protein (CNR1 EC-Fc) are used in vitro to enhance the activity of CNR1 EC-Fc. In addition, CNR1 was discovered in HEK293 T cells, CNR1 EC1 [RGD]-Fc fusion protein (CNR1 EC1 [RGD]-Fc), and RGD alignment in EC1 was detected in HEK293 T cells, CNR1 EC1 [RGE]-Fc fusion protein, and RGD alignment in EC1 fusion protein. RGDS antibody is used to inhibit β1 Integrin function, HEK293T cells and CNR1 EC-Fc adhesion. CNR1 protein is present in HEK293T cells, and β1 Integrin protein is present in the same way as CNR1 protein in HEK 293 T cells. The above results show that CNR-1 β1 Integrin interacts with Ca-dependent cell adhesion activity, and that the structure formation mechanism is related to the interaction between CNR-β1 Integrin and Ca.

项目成果

Takei Y, Hamada S, Senzaki K, Mutoh T, Sugino H, Yagi T.: "Two novel CNRs from the CNR gene cluster have molecular features distinct from those of CNR1 to 8"Genomics. 72. 321-330 (2001)

Takei Y、Hamada S、Senzaki K、Mutoh T、Sugino H、Yagi T.：“来自 CNR 基因簇的两个新 CNR 具有与 CNR1 至 8 不同的分子特征”基因组学。

Yagi T, Tada M, Tanaka Y, Senzaki K, et al.: "Diversity of the cadherin-related neuronal receptor family in the nervous system"International Congress Series. 1246. 127-136 (2002)

Yagi T、Tada M、Tanaka Y、Senzaki K 等人：“神经系统中钙粘蛋白相关神经元受体家族的多样性”国际大会系列。

Mutoh T., Hamada S., Senzaki K., Murata Y., Yagi T.: "Cadherin-related neuronal receptor 1 (CNR1) has cell-adhesion activity with β1 integrin mediated through the RGD site of CNR1."Experimental Cell Research. 294・2. 494-508 (2004)

Mutoh T.、Hamada S.、Senzaki K.、Murata Y.、Yagi T.：“钙粘蛋白相关神经元受体 1 (CNR1) 通过 CNR1 的 RGD 位点介导的 β1 整联蛋白具有细胞粘附活性。”实验细胞研究294・2。494-508（2004）