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ヘパラナーゼの局在化による機能調節:マクロファージ及び類縁細胞における役割

乙酰肝素酶定位的功能调节：在巨噬细胞和相关细胞中的作用

基本信息

批准号：
15040206
负责人：
東伸昭
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

基底膜は組織間の「しきり」であるのみならず、様々な生理活性物質を保持する貯蔵庫である。この「しきり」の体積の大部分を占め、かつ生理活性物質と直接会合するヘパラン硫酸はヘパラナーゼなどの酵素によって代謝、分解される。種々の疾患の成立には免疫細胞などの浸潤を伴うプロセスが重要であるが、このときヘパラナーゼは細胞の浸潤能の制御、細胞外マトリクスからの生理活性物質の切り出し、の2点で重要な意味を持つ。本研究では、病態形成に伴うヘパラナーゼの生理的意義の解明を目標に、(1)好中球の脱顆粒に伴う膜会合型ヘパラナーゼの発現機構、(2)病態モデル動物の解析を意図した抗マウスヘパラナーゼモノクローナル抗体の作製、の2点を検討した。(1)遊走因子fMLP, IL-8の刺激により、ヘパラナーゼ分子が細胞表面に検出されることをフローサイトメトリー、共焦点レーザー顕微鏡により確認した。さらに免疫沈降によりこの分子が細胞表面に位置することを示した。またヘパラナーゼと共沈する細胞表面分子を2種類(65kD,43kD)検出した。これらの分子がヘパラナーゼの細胞表面への発現を制御する可能性を考え、分子の同定を行う。(2)活性を有する組換え型マウスヘパラナーゼを免疫原としてラットに免疫を行い、リンパ節細胞とミエローマ細胞との細胞融合を行った。固相化ヘパラナーゼを用いたELISA、ヘパラナーゼ発現細胞を用いた細胞染色により、16種類のモノクローナル抗体を確立した。これを用いた組織染色を行い、B16マウスメラノーマ細胞においてヘパラナーゼが細胞の表面に発現し生体内に形成された転移巣で浸潤先端に発現すること、クロトン油による皮膚炎症部位に浸潤する好中球の一部がヘパラナーゼを発現すること、また動脈硬化のモデルマウスにおいて外膜に浸潤するマクロファージの多くがヘパラナーゼを発現することを見出した。

The basement membrane is a reservoir of physiologically active substances. Most of the volume of this "" is occupied, and the physiologically active substances are directly combined with sulfuric acid, and the enzymes are metabolized and decomposed. The establishment of various diseases is important for the infiltration of immune cells, the control of cell infiltration, the extraction of physiologically active substances from extracellular cells, and the importance of two points. The purpose of this study is to clarify the physiological significance of pathological formation,(1) the mechanism of the occurrence of degranulation associated with membrane aggregation,(2) the analysis of pathological animals, and the mechanism of anti-pathological antibodies. (1)The stimulation of fMLP, IL-8, and the expression of IL-8 on the cell surface were identified by microscopy. This shows the location of these molecules on the cell surface during immune sedimentation. Two kinds of molecules (65kD,43kD) appeared on the cell surface. The possibility of controlling the appearance of these molecules on the cell surface is examined and the identity of the molecules is determined. (2)The cell fusion of the cell 16 kinds of antibodies were established by ELISA and cell staining. The tissue staining process, B16, was observed on the surface of the cell, and the infiltration process was observed in the body. The hardening of the arteries is due to the presence of the outer membrane.