ヘパラナーゼによる糖鎖プロセシングの可視化と免疫細胞の機能調節における役割の解明

乙酰肝素酶加工聚糖的可视化及其在调节免疫细胞功能中的作用

基本信息

批准号：
19659012
负责人：
東伸昭
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題ではヘパラン硫酸・ヘパリンという硫酸化多糖を対象として、エンド型グリコシダーゼによるこの多糖の限定切断や低分子化を可視化すること、硫酸化多糖と相互作用する分子や細胞の機能が限定切断に伴い調節を受ける機構を解明すること、の2点について、免疫細胞を対象に検討を行ってきた。マスト細胞で生じるヘパリン低分子化は穎粒内物質の生理活性変化を伴う「プロセシング」と考えられることを平成19年度に報告した。 20年度はこれをふまえ、ヘパリン低分子化に伴うマスト細胞の機能変化を広く検討した。顆粒内にヘパリンを蓄積し、かつヘパラナーゼを微弱に発現するマスト細胞株MSTにヘパラナーゼ遺伝子を導入することにより、生体内の結合組織型マスト細胞と同レベルのヘパラナーゼを発現する遺伝子導入株の作製に成功した。この細胞は脱顆粒の閾値、ヒスタミン、ヘキソサミニダーゼの放出量についてモック細胞との間に明確な差を示さなかった。一方、可溶化物が示す高分子基質(フィブロネクチン)の切断活性はペパラナーゼ遺伝子導入株で亢進した。脱顆粒時に放出されるヘパリンを顆粒内蓄積量と考え、これを2つの方法で測定した。代謝標識したヘパリンの放射活性による定量ではヘパラナーゼ遺伝子導入株の方が20%程度高かったが、ウロン酸総量の定量では逆に30%程度少ないという予想外の結果を得た。ヘパラナーゼ遺伝子導入株の顆粒内では生合成されて間もないヘパリンの割合が多い、すなわち顆粒内ヘパリンのターンオーバーが早いものと解釈される。ヘパリン以外の顆粒内生理活性物質について、その細胞内局在と寿命を変化させる可能性がある。

该研究主题一直集中在两点上的免疫细胞上：可视化有限的裂解和低分子通过内糖糖苷酶的裂解和低分子，以及分子和细胞与硫酸化多糖的功能相互作用的机制，由于裂解有限而受到硫酸化多糖的相互作用。在2007年，我们报道说，在肥大细胞中发生的肝素低分子量形成被认为是“加工”的，伴随着粒内物质生理活性的变化。基于2020财年，我们广泛研究了由于肝素分子减少而导致的肥大细胞功能变化。通过将肝素酶基因引入肥大细胞系MST，该基因在颗粒中积聚肝素并稍微表达肝素酶，我们成功地产生了转基因菌株，该菌株表达与体内结缔组织类型肥大细胞相同的水平。这些细胞在脱粒阈值，组胺和己糖胺酶释放水平中没有明显的差异。另一方面，在pepamparanase基因转染菌株中增强了由裂解物代表的聚合物底物（纤连蛋白）的裂解活性。在脱粒过程中释放的肝素被认为是刻度内积累的量，这是使用两种方法测量的。当通过标记肝素的代谢的放射性定量确定时，肝素酶转基因菌株高约20％，但出乎意料的结果是，尿酸的总含量确定为低约30％。可以解释说，在肝素酶转移的菌株的颗粒中，肝素很高，最近被生物合成，也就是说，换句话说，颗粒中肝素的营业额很快。除肝素以外的其他生理活性物质可能会改变其亚细胞定位和寿命。

项目成果

期刊论文数量（22）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

ヘパラナーゼを介した免疫細胞の機能調節

通过乙酰肝素酶调节免疫细胞功能

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
Pharma Vision News 11
影响因子：
0
作者：
Komatsu;et. al.;東伸昭
通讯作者：
東伸昭

ヘパラナーゼを介した免疫細胞の機能調節(受賞講演)

通过乙酰肝素酶调节免疫细胞功能（获奖讲座）

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
野寺快明;他;東伸昭
通讯作者：
東伸昭

マウス好中球亜集団におけるヘパラナーゼmRNA及び蛋白質の発現と細胞内局在

小鼠中性粒细胞亚群中乙酰肝素酶 mRNA 和蛋白的表达和亚细胞定位

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
須江真由美;他
通讯作者：
他

マウス大腸癌の肝転移形成におけるアシアロ糖蛋白質受容体(ASGPR)の役割

脱唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）在小鼠结直肠癌肝转移形成中的作用

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
上野傑;他
通讯作者：
他

ヘパラナーゼの分子種を見分ける抗ヘパラナーゼモノクローナル抗体の確立

区分乙酰肝素酶分子种类的抗乙酰肝素酶单克隆抗体的建立

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
0
作者：
東伸昭;他
通讯作者：
他

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東伸昭其他文献

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发表时间：
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作者：
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通讯作者：
中島元夫

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作者：
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
東伸昭;脇紀彦;須藤勧耀;鈴木沙奈;奥輝明;辻勉;高橋勝彦;中島元夫;入村達郎;細見紘幸,小柴佐和子,松本卓也,上田拓,小菅真央,飯居宏美,中田晋,岩﨑宏樹,山下正行,小島直人
通讯作者：
細見紘幸,小柴佐和子,松本卓也,上田拓,小菅真央,飯居宏美,中田晋,岩﨑宏樹,山下正行,小島直人