出芽酵母プロテインホスファターゼの機能ゲノム科学

酿酒酵母蛋白磷酸酶的功能基因组学

• 批准号: 16013227
• 负责人: 原島 俊
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013227/
• 关键词: 酵母; ゲノム; プロテインホスファターゼ; 遺伝子破壊; 機能重複; トランスクリプトーム

出芽酵母が持つ32種のプロテインホスファターゼ(PPase)の機能を明らかにするため、PPaseとプロテインキナーゼ(PKase)二重破壊株の体系的な表現型解析からPPaseと遺伝的相互作用するPKaseを同定し、着目するPPaseと基質を共有するPKaseの側面からPPaseの機能を明らかにする新しいアプローチを行った。PPase破壊株では、PPaseの基質タンパクの非リン酸化型が減少し、リン酸化型が過剰になっていると予想される。もしこの状況が着目するPPaseの破壊株が示す表現型を引き起こしているなら、基質タンパクをリン酸化するPKaseを破壊することによって、PPase破壊株が示す表現型が抑圧されるであろう。そこで、表現型を示すPPaseの破壊株に、破壊しても致死でない全てのPKase(110種)の破壊変異を、全ての組合わせでを導入し、その破壊がPPase破壊株が示す表現型を抑圧するPKaseを同定する。当研究室では、既に、SIW14遺伝子破壊株のカフェイン感受性(Caf^s)を見出している。そこで、本研究では、この表現型とPPaseの中でCaf^sを示すPpz1の知見を手がかりに、Siw14の機能解明を目的とした。まず、Δppz1Δsiw14のカフェイン感受性度を調べたところ、各単独破壊よりも上昇が見られた。Ppz1と異なる経路で働くSLT2(MAPK)も、破壊するとCaf^sが、この表現型は、多コピーSIW14で抑圧されることが知られている。そこで、Δsiw14Δslt2のカフェイン感受性度を調べたが、加算的な効果は見られなかった。Slt2の下流に存在し、直接活性を制御されている因子として、Rlm1、Mck1、Swi4とSwi6が知られており、それぞれ単一破壊株はCaf^Sを示す。そこで、Δsiw14Δrlm1、Δsiw14Δmck1、Δsiw14Δswi4、Δsiw14Δswi6でカフェイン感受性度を調べたところ、Δsiw14Δswi4、Δsiw14Δswi6において、加算的な効果が見られなかった。次にΔsiw14、Δppz1では、基質の過剰なリン酸化が原因でCaf^sになると考え、それぞれの基質をリン酸化するプロテインキナーゼ(PKase)も破壊すれば、Caf^Sは抑圧されるのではと考えた。101種の非必須PKase遺伝子と、SIW14およびPPZ1との二重破壊株を作成したところ、Δsiw14Δnpr1、Δppz1Δsat4、Δppz1Δhal5でCaf^sの抑圧が観察された。以上の結果より、Siw14は、Slt2と同一系路上で下流のSwi4、Swi6に作用していること、Siw14とNpr1は拮抗的な作用をしている事、また、Ppz1とSat4、Ha15は、基質を共有している可能性が示唆された。

Saccharomyces cerevisiae was able to analyze the double-broken strain (PKase) of the double-broken strain system (PKase) by using 32 kinds of PPase machines. The interaction between the two strains was analyzed. The interaction between PKase and PKase was identified, and the PKase data were shared by the target PKase. The PPase machine was able to understand the new model of the virus. PPase isolates, PPase isolates, non-phenotypic acidified strains and acidified strains were detected. The PPase breakage showed that the phenotype was induced, the PKase was acidified, the PPase was broken, and the phenotype was suppressed. The virus and the table type showed that the PPase strain was broken, the lethal strain of the virus was broken, the whole PKase was broken, the whole virus was integrated into the virus, and the virus was broken. The PPase strain showed that the phenotype was the same as that of the PKase. When the laboratory samples were broken, the susceptibility (Caf

项目成果

酵母ゲノムの大規模改変技術の開発とバイオサイエンス、バイオテクノロジーへの応用

酵母基因组大规模修饰技术开发及其在生物科学和生物技术中的应用

• 发表时间: 2004
• 期刊: 生物工学会誌 82(11)
• 作者: Yasuhiro Ooki;Toshiki Uchiumi;Yasuyo Tsukushi;Werner Klipp;Kim Y.et al.;Sugiyama M. et al.;Liu H.et al.;Auesukaree C. et al.;杉山峰崇 他
• 通讯作者: 杉山峰崇 他

Obtaining transgenic plants using the bio-active beads method

• DOI: 10.1007/s10265-003-0141-3
• 发表时间: 2004-02
• 期刊: Journal of Plant Research
• 影响因子: 2.8
• 作者: Haibo Liu;A. Kawabe;S. Matsunaga;T. Murakawa;A. Mizukami;Masanobu Yanagisawa;E. Nagamori;S. Harashima;A. Kobayashi;K. Fukui

A yeast artificial chromosome-splitting vector designed for precise manipulation of specific plant chromosome region

• DOI: 10.1263/jbb.99.55
• 发表时间: 2005-01-17
• 期刊: JOURNAL OF BIOSCIENCE AND BIOENGINEERING
• 影响因子: 2.8
• 作者: Kim, Y;Kaneko, Y;Harashima, S
• 通讯作者: Harashima, S

Intracellular Phosphate Serves as a Serves as a Signal for the Regulation of the PHO Pathway in Saccharomyces cerevisiae

细胞内磷酸盐作为调节酿酒酵母 PHO 途径的信号

• 发表时间: 2004
• 期刊: The Journal of Biological Chemistry 279(17)
• 作者: Yasuhiro Ooki;Toshiki Uchiumi;Yasuyo Tsukushi;Werner Klipp;Kim Y.et al.;Sugiyama M. et al.;Liu H.et al.;Auesukaree C. et al.
• 通讯作者: Auesukaree C. et al.

Application of the Bio-Active Beads Method in Rice Transformation

生物活性珠法在水稻转化中的应用

• 发表时间: 2004
• 期刊: Plant Biotechnology 7
• 作者: Suzuki;Y. et al.;Hen Lin
• 通讯作者: Hen Lin