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分子系統解析で絞り込んだ未知機能蛋白質の実験的な機能解析

通过分子系统发育分析缩小功能未知蛋白质的实验功能分析

基本信息

批准号：
16013243
负责人：
横堀伸一
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013243/
关键词：
分子系統解析古細菌ロイシン生合成系 TCA回路

项目摘要

ロイシン生合成に関わる4種の蛋白質遺伝子(leuA、leuB、leuC、leuD)とその相同蛋白質遺伝子(TCA回路、リジン生合成に関わる蛋白質遺伝子と、BLAST検索等で見出された機能未知蛋白質遺伝子)について、それぞれ分子系統解析を行った。既に機能解析がなされている蛋白質を系統樹上にマップし、系統樹の樹形と機能から、各蛋白質を改めてグルーピングした。いずれの系統樹でも、古細菌(殊にメタン菌)が、ロイシン合成系酵素とTCA回路の酵素との境界領域に位置する場合が多いことが観察された。また、真正細菌や真核生物に比べて、古細菌由来の蛋白質遺伝子のhomolog間の一次配列の差違が小さい傾向にあった。機能未知蛋白質のみで構成されている蛋白質グループに属する蛋白質と、機能の異なる蛋白質グループ同士の境界に系統樹上位置する蛋白質について、好熱性の古細菌(Sulfolobus tokodaii、Aeropyrum pernix、Pyrococcus horikoshii)とメタン産生好熱性古細菌Methanocaldococcus jannaschiiからの遺伝子の取得と、その大腸菌中での発現を試みた。発現を試みた蛋白質の過半数が、不溶性の封入体を作るか、発現しなかった。すなわち、ランダムに古細菌の蛋白質を選び、それらの発現効率を検討すると、2〜3割程度の蛋白質が発現し、可溶性画分に来るという結果であった。現在、封入体となっている蛋白質の可溶化など、蛋白質の発現・精製法について、再検討中である。

The same protein mutants (TCA loop, BLAST ligand, BLAST ligand, etc.) were synthesized and analyzed by molecular system analysis system. The machine can be used to analyze the data of the protein system, the shape of the system, and the performance of each protein system. The synthesis of enzymes, TCA loops, enzymes in the realm, and the location of the realm is very important. The real bacteria, the eukaryotes, the proteins, the homolog, the differences, the differences. The machine can not know that the protein product belongs to the protein pool, the protein pool is located on the same level of the system, the good bacteria (Sulfolobus tokodaii, Aeropyrum pernix, Pyrococcus horikoshii) are tested in the Methanocaldococcus jannaschii bacteria, and the test results are detected in the bacteria. It is shown that more than half of the protein is purified, the insoluble encapsulated body is used as a reagent, and the protein is not detected. The results showed that the protein concentration of antifungal bacteria was significantly higher than that of the control group (P < 0.05). The results showed that the protein was detected in 2-3 cuttings, and the results were analyzed by soluble picture analysis. Now, the sealing system is used to determine the solubility of the protein, the essence of the protein, and the concentration of the protein.