特異的γセクレターゼ阻害剤を用いた活性型プレセニリン複合体の調節機構の解析

特异性γ-分泌酶抑制剂分析活化早老素复合物的调控机制

• 批准号: 16015243
• 负责人: 池内 健
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16015243/
• 关键词: アルツハイマー病; プレセニリン; セクレターゼ; プロテアーゼ; 阻害剤; 遷移状態アナログ

1.分子プローブとしての特異的γセクレターゼ阻害剤の作成γセクレターゼを選択的に阻害する遷移状態アナログ型阻害剤,L-685,458にbenzophenoneおよびbiotinを付加した阻害剤(L-852,505)およびBODIPY-FLを付加した阻害剤(BODIPY-L658,458)を作成した.2.L-852,505を用いたプレセニリン(PS)複合体の生化学的解析野生型PS1安定発現株にL-852,505を作用させ,阻害剤依存性に光架橋したタンパクをSDS-PAGEにて分離後,PS1特異抗体で免疫ブロットしたところ,断片型PS1のみを検出した.家族性Alzheimer病関連PS1変異(ΔE9)では,野生型同様にL-852,505によるラベリングを認めたが,機能喪失型PS1変異(D385A)ではラベリング効果を認めなかった.PS複合体の構成因子であるnicastrin, APH-1, PEN2を共発現した細胞(ANPP)ではPS1断片のラベリング効果の著明な亢進を認め,活性型PS1複合体の形成増加が示唆された.3.BODIPY-L658,458を用いたPS複合体の免疫組織学的解析ANPP細胞においてBODIPY-L658,458染色を行うと,その蛍光は細胞表面からearly endosomeに検出した.内在性PS発現細胞ではBODIPY-L658,458の蛍光強度は低かった,しかしながら,L-852,505を界面活性剤非存在下で培養細胞に作用させ,光架橋後,抗biotin抗体で免疫染色を行ったところ細胞表面に蛍光を検出し,内在性レベルでも細胞表面にPSを検出した.

1. Molecular プ ロ ー ブ と し て の specific gamma セ ク レ タ ー ゼ resistance against tonic の made gamma セ ク レ タ ー ゼ を sentaku に resistance against す る migration state ア ナ ロ グ type resistance against tonic, L - 685458 に benzophenone お よ び biotin を plus し た resistance against tonic (L - 852505) お よ び BODIPY - FL を Plus し た resistance against tonic (BODIPY - L658, 458) を made し た. 2. L - 852505 を with い た プ レ セ ニ リ ン (PS) composite の biochemical analytical wild-type PS1 settle 発 strains に now L - 852505 を role さ せ, resistance against tonic dependency に light bridge し た タ ン パ ク を sds-page に て points After isolation, the PS1-specific antibody で immunizes ブロット <s:1> たと ろ ろ, and the fragmented PS1 <s:1> みを検 is released た た. Familial Alzheimer disease masato even PS1 - vision (Δ E9) で は, wild type with others に L - 852505 に よ る ラ ベ リ ン グ を recognize め た が, loss function type PS1 - vision (D385A) で は ラ ベ リ ン グ unseen fruit を recognize め な か っ た. PS complex の constitute factor で あ る nicastrin, APH-1, PEN2 を 発 now total し た cells (ANPP) で は PS1 fragment の ラ ベ リ ン グ unseen fruit の zhao Ming な hyperthyroidism を め, active type PS1 compound の formation raised が requirement by sucking さ れ た. 3. BODIPY - L658, 458 use を い た PS complex の histologic ANPP of immune cells に お い て BODIPY - L658 458 staining を rows うと,そ <s:1> 蛍 蛍 light cell surface に検 ら らearly endosomes に検 to produce た. Internality PS 発 now cells で は BODIPY - L658, 458 の 蛍 low light intensity は か っ た, し か し な が ら, L - 852505 を interface active で cultivation in the presence of one of the cells に さ せ, Bridges, light line of biotin antibody で immune dyeing を っ た と こ ろ cell surface に 蛍 light を 検 し, internality レ ベ ル で も On the surface of the cell, にPSを検 gives rise to た.

项目成果

病気はどこまでゲノムで決められているか:痴呆

痴呆症在多大程度上是由基因组决定的？

• 发表时间: 2004
• 期刊: Molecular Medicine 41・増刊号
• 作者: 菊池修;片山統裕;辛島彰洋;中尾光之;池内 健;池内 健;池内 健
• 通讯作者: 池内 健

プレセニリン

早老素

• 发表时间: 2005
• 期刊: Dementia Japan (印刷中)
• 作者: 菊池修;片山統裕;辛島彰洋;中尾光之;池内 健
• 通讯作者: 池内 健

アルツハイマー病:β・γセクレターゼ阻害剤

阿尔茨海默病：β/γ分泌酶抑制剂

• 发表时间: 2004
• 期刊: BRAIN MEDICAL 16・1
• 作者: 菊池修;片山統裕;辛島彰洋;中尾光之;池内 健;池内 健
• 通讯作者: 池内 健