高親和性抗体産生の分子機序

高亲和力抗体产生的分子机制

基本信息

批准号：
16017247
负责人：
長岡仁
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

有効な獲得免疫の鍵の一つであるクラススイッチ組み換え(CSR)と体細胞突然変異(SHM)反応の分子機構を解明する為、両反応に必須の分子であるActivation Induced Deaminase(AID)に焦点を当てて解析を行う。(1)CSR又はSHM特異的に働く優勢抑制型変異体/ペプチドの探索それに付帯してCSRに必要だがSHMには必須でないAIDのC末端領域に結合すると予想される因子の同定。(2)AIDの細胞内局在の解析とそれを規定する機構の解明、ならびにそのCSR SHM活性との関連の探索。(3)SHMにおけるAID発現後の新規のタンパク質合成の必要性の有無の確認。を目指す。(結果および考察)我々は、AIDの細胞内局在の解析とそれを規定する機構の解明、ならびにそのCSR SHM活性との関連の探索のため、野生型並びに変異を持つAIDとGFPの融合タンパク質を多数作成し、細胞内局在を決める領域を決定した。その結果AIDはN末端側に弱い核移行シグナル。C末端側に核排出シグナルを持ち、核と細胞質を行き来する事を明らかにした。核外移行はCRM1依存性である。AIDのC末端側領域はCSRに重要だがSHMには必須ではない。逆にCSR活性は維持されるがSHMのみが失われる変異があるかどうかをランダムに変異を導入したAIDを用いて検討した。その結果、N末端側の部分にSHMに重要だがCSRに必須でない部分がある事を見いだした。CSRとSHMには、それぞれ異なる補因子がN末端C末端に結合する事を示唆すると考えた。Estrogen受容体との融合により活性誘導できるAIDを用い、CSR及びSHM誘導で生ずる特異的DNA切断を、ヒストンH2AXリン酸化を指標に検出できる系を確立した。その系に於いてDNA切断はAID活性化後の蛋白合成を必要とする事が明らかとなった。

为了阐明类转换重组（CSR）和体细胞突变（SHM）反应的分子机制，这是有效加速免疫力的关键之一，我们将重点介绍激活诱导的脱氨酶（AID），这是两种反应的分子。（1）搜索在CSR或SHM中专门起作用的主要抑制突变体/肽，这些因素与CSR所需但不是SHM所必需的AIDS的C末端区域有望结合的因素。（2）分析艾滋病的亚细胞定位，阐明控制它们的机制，并探索他们与CSR SHM活性的关联。（3）确认在SHM中有助于表达后是否需要新型蛋白质合成。目的是为此。（结果和讨论）为了分析艾滋病的亚细胞定位，阐明了定义它们的机制，并搜索它们与CSR SHM活性的关联，我们创建了大量艾滋病和GFPS的融合蛋白，其野生型和突变的融合蛋白，并确定了确定亚细胞定位的区域。结果，艾滋病是N末端处的核转运信号较弱。有人发现它在C末端具有核排泄信号，并且在细胞核和细胞质之间旅行。核外转移是CRM1依赖性的。援助的C末端区域对CSR很重要，但对SHM并不重要。相反，是否存在维持CSR活性的突变，但仅使用引入突变的艾滋病研究了SHM。结果，我们发现N端部分中有一部分对SHM很重要，但对CSR并不重要。我们认为CSR和SHM中的不同辅助因子分别表明不同的辅因子与N末端C末端结合。使用可以通过与雌激素受体融合来诱导活性的辅助，我们建立了一个系统，在该系统中，可以使用组蛋白H2AX磷酸化作为指示器检测到CSR和SHM诱导中发生的特定DNA裂解。已经表明，DNA裂解需要在该系统中辅助激活后的蛋白质合成。

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A B Cell Receptor with Two lg{alpha} Cytoplasmic Domains Supports Development of Mature But Anergic B Cells

具有两个 lg{alpha} 胞质结构域的 B 细胞受体支持成熟但无能的 B 细胞的发育

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J Exp Med 199
影响因子：
0
作者：
Reichlin;A.
通讯作者：
A.

Uracil DNA glycosylase activity is dispensable for immunoglobulin class switch

尿嘧啶 DNA 糖基化酶活性对于免疫球蛋白类别转换是可有可无的

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Science 305
影响因子：
0
作者：
Begum;N.A.;Kinoshita;K.;Kakazu;N.;Muramatsu;M.;Nagaoka;H.;Shinkura;R.;Biniszkiewicz;D.;Boyer;L.A.;Jaenisch;R.;Honjo;T.
通讯作者：
T.

Evolution of class switch recombination function in fish activation-induced cytidine deaminase, AID

鱼类激活诱导胞苷脱氨酶 AID 中类别转换重组功能的进化

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Int Immunol 18・1
影响因子：
0
作者：
Wakae;K.et al.
通讯作者：
K.et al.

DNA cleavage in immunoglobulin somatic hypermutation depends on de novo protein synthesis but not on uracil DNA glycosylase

免疫球蛋白体细胞超突变中的 DNA 切割取决于从头蛋白质合成，而不取决于尿嘧啶 DNA 糖基化酶

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America Vol.102, no.6
影响因子：
0
作者：
石田昌義;田中義正;湊長博;杉山卓史;杉山卓史;杉山卓史;杉山卓史;Hitoshi Nagaoka
通讯作者：
Hitoshi Nagaoka

Negative regulation of activation-induced cytidine deaminase in B cells

DOI：
10.1073/pnas.0510970103
发表时间：
2006-02-21
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Muto, T;Okazaki, IM;Honjo, T
通讯作者：
Honjo, T