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概日リズム因子と発がん制御とのクロストークの研究

昼夜节律因素与癌变控制的串扰研究

基本信息

批准号：
16021237
负责人：
八木田和弘
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16021237/
关键词：
概日リズム mPER2 リアルタイムモニター

项目摘要

本研究課題は、概日リズムと発がん制御とのクロストークの研究である。これまでの研究で、時計遺伝子mPer2のノックアウトマウスにおいてリンパ腫が発生することが知られている。本研究課題では、哺乳類時計タンパクmPER2について、細胞内でどのような因子と複合体を形成しているのかを、複合体タンパク精製とそれに引き続く質量分析による解析で明らかにする。我々は、Tet-Offシステムを用いて薬剤依存性にflag-mPer2遺伝子の発現が制御できる安定細胞株を作成した。このTet-Off/flag-mPer2細胞株を大量培養し、抗flag抗体を固定したアフィニティーカラムを用いてflag-mPER2を含むタンパク複合体を精製した。得られたタンパク複合体をSDS-PAGEにて展開し、タンパクを分離した。特異的なバンドを切り出し、トリプシンでゲル内消化したのち、MALDI-TOF MS/MS法にて質量分析を行った。その結果、いくつかのタンパクが同定されたが、このタンパクの概日リズムにおよぼす機能と、発がん制御につながる機能との両面から詳細に検討している。今後、mPer2以外の時計遺伝子についても同様に安定発現細胞株を樹立し、タンパク質複合体の解析を行っていく予定である。また、細胞レベルでの研究の他に個体レベルでmPER2発現と発がん制御との関連を解析するために、Tetシステムを利用した時間的な発現調節が可能な遺伝子導入マウスの作製を行っている。現在、遺伝子導入マウスが複数ライン取得できており、導入遺伝子の発現が適切に認められるかを検討している段階である。さらに、RNAiを用いた遺伝子ノックダウン法を培養細胞で確立し、その概日時計に及ぼす影響をルシフェラーゼを用いた生物発光によるリアルタイムモニター法にて測定する系を構築した。現在までに、時計遺伝子群についてRNAiを行い、培養細胞における概日時計の異常を観測した(投稿準備中)。この系を用いて、概日時計を構成する因子と発がん制御因子との分子ネットワークを解析している。

In the course of this study, we will be in charge of the research and control of the research project. In the course of research and planning, mPer2 students are required to know how to learn about it. In this study, mammalian chronograph was used to analyze the mPER2 gene, the complex of intracellular DNA was formed, and the complex was used to analyze the quantity of DNA. We, Tet-Off, have made the cell strain of diazepam by using the flag-mPer2 cell strain that is dependent on the drug. The Tet-Off/flag-mPer2 cell line was cultured in large quantities, and the anti-flag antibody was fixed. The flag-mPER2 was used to contain the complex. The SDS-PAGE complex has been developed and separated. Special methods for quantitative analysis, such as internal digestion, MALDI-TOF MS/MS method and quantitative analysis, were used. The results of the test, the results, the results and the results. In the future, during the period outside of mPer2, we used the same method to determine the stability of the cell line and the combination of the cell line and the cell line. In the study of other personal health problems, cell phones are used in the study of other personal health problems. In other cases, mPER2 users are responsible for the control and analysis of mobile phones, and Tetty phones make use of the spare time to realize that they may be loaded into their computers to perform business operations. Now, if you want to get a copy of the data, you can get a copy of the data, and then you can get a copy of the data. Now, if you want to get a copy of the data, you can get a copy of the data. Now, if you want to get a copy of the data, you can get a copy of the data from each other. In the laboratory, the RNAi was used to make sure that the cell was set up, the approximate daily time was calculated, and the temperature was measured by the method of biosensitive photoluminescence. At present, we are in the process of preparing for the submission of a regular RNAi program (in preparation for submission). The system is used to analyze and analyze the factors in the system, the molecular control factor, the control factor and the control factor.