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栄養源からのシグナルによる酵母細胞周期の制御機構

营养源信号控制酵母细胞周期的机制

基本信息

批准号：
16026241
负责人：
西沢正文
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

Rim101によるCLN2の発現抑制をPho85が解除する機構を解析するために、Pho85とRim101の生化学的相互作用を調べた結果、、Rim101のプロセシングは野生型株とpho85欠失株で差が見られず、さらにRim101のバンドシフトパターンにも大きな違いは見られなかった。これらのことから、Pho85が直接Rim101をリン酸化しているとは考えにくい。RIM101はアルカリ条件下で誘導されることから、pho85欠失株の細胞内pHを測定したところ、野生型株よりもアルカリ側になっていることを見いだした。これより、pho85欠失により細胞内がアルカリ条件となった結果、RIM101発現が誘導され、CLN2抑制が起きると考えるのが妥当と結論した。pho85欠失株中でPho4を過剰発現させると生育停止を引きおこす。Pho4が結合する部位を酵母ゲノム全領域について、クロマチン免疫沈降とゲノム全領域をカバーするtiling arrayへのハイブリダイゼーションを組み合わせたChIP on Chip法によって解析したところ、Pho4がCLN3,WHI5,FKH2など細胞周期を制御する遺伝子の上流域に結合することを見いだした。Pho4が実際にこれら遺伝子のプロモーター領域に結合することを、遺伝子特異的なプライマーを用いて免疫沈降クロマチン画分をPCRで増幅できることで確認した。特にFKH2発現はリン酸濃度とPho4に依存することがわかり、G2/M期の制御にPho85-Pho4が関与する可能性が示された。

Rim101 CLN2 showed inhibition of biochemical interaction between Pho85 and Pho85. The results showed that the wild type plant pho85 was deficient. The missing plant, the missing plant, the lost plant, the missing plant, the missing plant Pho85, direct Rim101, acidify, acid, acid and acid. Under the condition of RIM101 spores, the missing plants of pho85 were detected by intracellular pH assay, and the wild type strains were detected by pH assay. The results of the experiments on the condition of pho85 missing cytosolic DNA, the results of RIM101 detection, the initiation of CLN2 inhibition, and the proper results were tested. In pho85 deficient plants, Pho4 was detected, fertility stopped, and pregnancy was induced. Pho4 is used to analyze the whole field of yeast, the whole field of yeast, the immunoprecipitation system, the immune system, the whole field, the whole range, the whole field, the whole range of yeast, the whole field, the whole In the field of Pho4, there is a lot of information in the field of information. In combination with the information in the field of information and special information, you can use the immune sedimentation device to divide the PCR image. In particular, FKH2 shows that the acidity, Pho4 dependence, and the possibility of controlling Pho85-Pho4 in the M phase of G2par are significant.