酵母CDC28キナーゼファミリーのPHO85キナーゼによる転写と細胞周期の制御

酵母 CDC28 激酶家族 PHO85 激酶对转录和细胞周期的调节

• 批准号: 05269222
• 负责人: 西沢 正文
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05269222/
• 关键词: 細胞周期; サイクリン; プロテインキナーゼ; 転写制御; タンパク質リン酸化

1.pho85変異とGAL、SUC遺伝子の発現の関係を調べた結果、GAL2、GAL7、GAL10、SUC2の発現は野生型と比べ差がなかった。ガラクトース資化能はPHO4遺伝子の欠失によって回復すること、SUC2遺伝子の上流域からグルコース抑制に関わるSKO1/ACR1結合部位を欠失させた遺伝子の発現はpho85変異により活性化されることなどから、PHO85キナーゼはPHO4を介してグルコースによる遺伝子発現の制御に関わっている可能性が考えられる。2.PHO85キナーゼを大腸菌に生産させ精製した。一方、GST-PHO85を発現している酵母細胞から粗抽出液を調製し試験管内でキナーゼ活性を測定したところ、PHO80過剰発現によりPHO85キナーゼ活性が著しく促進されることを見いだした。PHO85キナーゼのPSTAIR配列の変異体およびCDC28キナーゼの活性リン酸化部位に相当するF165S166の変異体の解析の結果、(1)E53AあるいはK58A変異はPHO85キナーゼの機能を失わせ、特にE53A変異はdominant negativeに機能した、(2)CDC28型のPSTAIR配列を持たせた変異体は多コピーでpho85変異を相補できるが細胞の生育を遅くさせた。この生育遅延はCLN3やCLB1の過剰発現により抑圧された。(3)cdc28変異株に(2)の変異体を導入すると制限温度の低下、生育の遅延がみられた。(4)Y165T166(CDC28型)、FT、FAのいずれの変異体もpho85変異を相補できたが、FA変異体は過剰発現により生育遅延を示した。以上より、PSTAIR配列はPHO85キナーゼの機能に重要であり、PHO85キナーゼはCDC28キナーゼと異なる制御サブユニットを持つが、おそらくその一部は共有(あるいは交換可能)していると考えられる。

1. The relationship between the とGAL of pho85 variation and the 伝 offspring of SUC is を. The べた results show that the <s:1> wild type と of GAL2, GAL7, GAL10, and SUC2 is worse than べ がな った った. ガ ラ ク ト ー ス endowment is changed to は PHO4 heritage 伝 の owe son lost に よ っ て reply す る こ と, SUC2 heritage in the upper reaches of the son 伝 の か ら グ ル コ ー ス inhibit に masato わ る SKO1 / ACR1 combining site を owe さ せ た posthumous son 伝 の 発 now は pho85 - different に よ り activeness さ れ る こ と な ど か ら, pho85 キ ナ ー ゼ は PHO4 を interface し て グ ル コ ー ス に よ る posthumous son 伝 発 is の suppression に masato わ っ て い る possibility が exam え ら れ る. 2.PHO85キナ キナ ゼを ゼを E. coli に production させ refining た た. One party, the GST - PHO85 を 発 now し て い る yeast cells か ら crude extract を modulation し test tube で キ ナ ー ゼ determination of active を し た と こ ろ, PHO80 turning 発 now に よ り PHO85 キ ナ ー ゼ active が the し く promote さ れ る こ と を see い だ し た. PHO85 キ ナ ー ゼ の PSTAIR match column の - variant お よ び CDC28 キ ナ ー ゼ の active リ ン acidification parts に quite す る F165S166 の - variant の analytical の results, (1) E53A あ る い は K58A - different は PHO85 キ ナ ー ゼ の function lost を わ せ, に E53A - different は dominant Negative function of に し た type, (2) CDC28 の PSTAIR match column を hold た せ た - variant は more コ ピ ー で pho85 - different fill を phase で き る が cells の fertility を 遅 く さ せ た. Youdaoplaceholder0 progeny 遅 CLN3やCLB1 is prolonged, resulting in によ <s:1> suppression された. (3) The cdc28 variant strain に(2) the <s:1> variant を is introduced into すると with a lower temperature <s:1> and a longer growth <s:1> 遅 がみられた. (4) Y165T166 (CDC28 type), FT, FA の い ず れ の - variant も pho85 - different fill を phase で き た が, FA - foreign は turning 発 now に よ り fertility 遅 delay を shown し た. Above よ り, PSTAIR match column は PHO85 キ ナ ー ゼ の function に important で あ り, PHO85 キ ナ ー ゼ は CDC28 キ ナ ー ゼ と different な る suppression サ ブ ユ ニ ッ ト を hold つ が, お そ ら く そ の a は Shared (あ る い は exchange may) し て い る と exam え ら れ る.

项目成果

西沢正文: "酵母遺伝子の転写活性化機構-「バイオインダストリーと酵母」" 医学出版センター(印刷中), (1994)

西泽雅文：“酵母基因的转录激活机制-‘生物工业和酵母’”医学出版中心（正在出版），（1994）

Amakasu,H.: "Isolation and characterization of SGEI:a yeast gene that partially suppresses the gall1 mutation in multiple copies." Genetics. 134,. 675-683 (1993)

Amakasu,H.：“SGEI 的分离和表征：一种在多个拷贝中部分抑制 gall1 突变的酵母基因。”

Suzuki,Y.: "The yeast GAL11 pritein is involved in regulation of the structure and the position effect of telomeres." Molecular and Cellular Biology. 14. (印刷中) (1994)

Suzuki, Y.：“酵母 GAL11 蛋白参与端粒的结构和位置效应的调节。”14（出版中）（1994 年）。