酵母細胞周期進行の補機エンジンとブレーキによる制御機構と創薬への応用

辅助引擎和制动器控制酵母细胞周期进程的机制及其在药物发现中的应用

• 批准号: 08660118
• 负责人: 西沢 正文
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660118/
• 关键词: 細胞周期; サイクリン依存性キナーゼ; Cdkインヒビター; 酵母

酵母Cdkファミリーに属するCdc28キナーゼとPho85キナーゼによる細胞周期制御の役割分担を調べるために、Pho85キナーゼによるS期のCdk阻害因子Sic1のリン酸化機構と、Pho85キナーゼのチェックポイントへの関与について実験を行った。1.Pho85キナーゼによるSic1のリン酸化。Pho85キナーゼがSic1をリン酸化するときのサイクリンパートナーを同定するために、Clb2,Clb5,Pcl1,Pcl2,Pho80をそれぞれ大腸菌細胞中で発現させ、それぞれのサイクリンを含む細胞抽出液を調製した。これと大腸菌から精製したPho85キナーゼを組み合わせ、Sic1のリン酸化能を調べたところ、Pho85-Pcl1複合体のみがSic1をリン酸化できることを見いだした。Cdc28-Cln2複合体も試験管内でSic1をリン酸化できることが知られているので、Cdc28とPho85によるSic1リン酸化の役割分担を調べた。Sic1分子中の3カ所のCdkによるリン酸化可能部位の変異体を作成し、野生株及びpho85欠失株中で過剰発現させたところどちらの株もG2期で生育が停止した。そこでリン酸化可能部位を一カ所ずつ残した変異体を過剰発現させたところ、pho85欠失株の生育は阻害するが野生株のそれは阻害しないものがあった。このことはCdc28とPho85がSic1の異なる部位をリン酸化している可能性を示している。2.ヒドロキシウレア、ベノミル、紫外線照射などのpho85欠失株に対する影響を調べたところ、pho85欠失株はヒドロキシウレアのみに超感受性であることがわかった。しかしヒドロキシウレア処理後の生存率は64%であり、pho85変異はチェックポイントには影響しないことがわかった。

Yeast Cdk inhibitors belong to Cdc28 and Pho85, and cell cycle regulation is regulated by cell cycle regulation. Pho85 and Cdk inhibitors are regulated by Sic1 and the regulation mechanism of cell cycle regulation is regulated by Pho 85 and Pho85. 1. Pho85 Sic1 Pho85, Clb2, Clb5, Pcl1, Pcl2,Pho80 are prepared from Escherichia coli cells. Pho85-Pcl1 complex is composed of two kinds of bacteria: Pho85-Pcl 1, Pho 85-Pcl 2, Pho 85-Pcl 3, Pho85-Pcl 4, Pho85, Pho85-Pcl 4, Pho 85, Ph Cdc28-Cln2 complex was found to be a sensitive, sensitive, and sensitive molecule for Sic1 and Pho85. In Sic-1, there are three possible sites of Cdk in the wild and pho-85 plants, and the growth of the plants in G2 stage is stopped. The possible sites of acidification include all kinds of plants, and all kinds of plants appear in the wild. The possibility of acidification of the different parts of Cdc28, Pho85 and Sic1 is shown. 2. The effect of ultraviolet irradiation on the supersensitivity of pho 85 plants was investigated. The survival rate after treatment was 64%.