ゼブラフィッシュのフォワード遺伝学による脊椎動物初期発生研究

利用斑马鱼正向遗传学进行早期脊椎动物发育研究

• 批准号: 16027252
• 负责人: 川上 浩一
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16027252/
• 关键词: ゼブラフィッシュ; トランスポゾン; 遺伝子トラップ; エンハンサートラップ; インサーショナルミュータジェネシス; 母性変異; ポジショナルクローニング; 器官形成; 分子生物学; 発生遺伝学; 挿入変異; 転移酵素; トランスジェニック動物

(1)トランスポゾンにhsp70プロモーターとGFP遺伝子を組み込んだエンハンサートラップベクターを構築した。このエンハンサートラップベクターをゼブラフィッシュゲノムにランダムに挿入させると、挿入部位近傍のエンハンサーによりhsp70プロモーターが活性化され、GFPを組織特異的・器官特異的に発現するゼブラフィッシュが非常に効率よく得られることがわかった。(2)トランスポゾンにhsp70プロモーターと酵母転写因子Gal4を組み込んだGal4エンハンサートラップベクターを構築しゲノムにランダムに挿入させた。これらGal4系統をGal4結合配列であるUASの下流にGFPをもつUAS-GFPリポータートランスジェニックフィッシュとかけあわせ、Gal4が組織特異的・器官特異的に発現することによりGFPが組織特異的・器官特異的に発現されるゼブラフィッシュを効率よく得ることができた。(3)エンハンサートラップベクター挿入の1つがWntシグナル伝達経路の転写因子Tcf7をコードする遺伝子を破壊していた。tcf7遺伝子は胸ヒレ、膜ヒレで発現している。ベクター挿入のホモ2倍体を作製したところ、胸ヒレ、膜ヒレの形態形成に異常がみられた。(4)遺伝子トラップベクター挿入の1つは、核孔を構成する蛋白質の1つNup214をコードする遺伝子を破壊していた。この挿入のホモ2倍体胚は、頭部と目の発生に異常を示し、胚性致死となる。この結果から、nup214遺伝子がゼブラフィッシュ初期発生において必須遺伝子であることを明らかにした。(5)母性変異bobtailの原因遺伝子のポジショナルクローニングに成功した。モリブデン補酵素生合成に必須なbobtail遺伝子はMolybdenum cofactor synthesis step-1をコードしていた。

(1)Hsp70 is the most important component of GFP gene. In this case, GFP is a tissue-specific and organ-specific protein that can be activated at a very high rate. (2)Hsp70 is a yeast factor. Gal4 is a component of Hsp70. Gal 4 system binding to GFP downstream of UAS, Gal 4 tissue-specific and organ-specific development, Gal4 tissue-specific and organ-specific development, and Gal4 binding to GFP downstream of UAS. (3)The first step is to set up a network of communication channels, and the second step is to set up a network of communication channels, and the third step is to set up a network of communication channels. tcf7 The child's chest and membrane are revealed in the middle of the day. In addition, the morphological changes of the two ploids in the breast and membrane were abnormal. (4)The protein is composed of 1,214 amino acids and 1,214 amino acids. The embryo of the diploid is abnormal in the development of the head and eye, and the embryo is lethal. The result of this is that the child must be born in the early stages of life. (5)The reason for maternal variation in bobtail is that it is successful in the treatment of children. The bobtail gene is required for Molydenum cofactor synthesis step-1.

项目成果

Transgenesis and gene trap methods in zebrafish by using the Tol2 transposable element.

• DOI: 10.1016/s0091-679x(04)77011-9
• 发表时间: 2004
• 期刊: Methods in cell biology
• 作者: K. Kawakami

The status, quality, and expansion of the NIH full-length cDNA project: The Mammalian Gene Collection (MGC)

• DOI: 10.1101/gr.2596504
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: GENOME RESEARCH
• 影响因子: 7
• 作者: Gerhard, DS;Wagner, L;Collins, FS
• 通讯作者: Collins, FS

A transposon-mediated gene trap approach identifies developmentally regulated genes in zebrafish

• DOI: 10.1016/j.devcel.2004.06.005
• 发表时间: 2004-07-01
• 期刊: DEVELOPMENTAL CELL
• 影响因子: 11.8
• 作者: Kawakami, K;Takeda, H;Mishina, M
• 通讯作者: Mishina, M

Excision of the Tol2 transposable element of the medaka fish Oryzias latipes in Xenopus laevis and Xenopus tropicalis

• DOI: 10.1016/j.gene.2004.05.013
• 发表时间: 2004-08-18
• 期刊: GENE
• 影响因子: 3.5
• 作者: Kawakami, K;Imanaka, K;Taira, M
• 通讯作者: Taira, M

The zebrafish pob gene encodes a novel protein required for survival of red cone photoreceptor cells

斑马鱼 pob 基因编码红锥感光细胞生存所需的新型蛋白质

• 发表时间: 2005
• 期刊: Genetics 170
• 作者: Taylor;M.R.;Kikkawa;S.;Diez-Juan;A.;Ramamurthy;V.;Kawakami K..Carmeliet;P.;Brockerhoff;S.E.
• 通讯作者: S.E.