使用斑马鱼插入诱变方法进行脊椎动物基因的功能分析-猫眼课题宝

使用斑马鱼插入诱变方法进行脊椎动物基因的功能分析

批准号：

15011256

负责人：

川上浩一

金额：

$3.84万

依托单位：

National Institute of Genetics

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

财政年份：

2003

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

2003 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011256/

关键词：

分子生物学発生遺伝学ゼブラフィッシュトランスポゾン挿入変異転移酵素遺伝子トラップトランスジェニック動物

项目摘要

项目成果

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英文摘要

(1)メダカトランスポゾンTol2因子を基に、スプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子、SV40のポリAシグナルをも遺伝子トラップベクターを構築した。転移酵素をコードするmRNAを試験管内で合成した。この遺伝子トラップベクタープラスミドDNAを転移酵素mRNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入した。(2)微量注入を施されたゼブラフィッシュを成魚に育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュ胚を得た。それら次世代ゼブラフィッシュ胚を実体蛍光顕微鏡下で観察することにより、GFPを時空間特異的に発現する遺伝子トラップゼブラフィッシュを多数分離することができた。(3)遺伝子トラップゼブラフィッシュのうちの1つでは、GFPが体節特異的に発現していた。この遺伝子トラップゼブラフィッシュをかけあわせることにより、単一のトランスポゾン挿入を有するゼブラフィッシュ系統を確立した。サザン解析により、体節特異的発現の原因となるトランスポゾン挿入を特定することができた。トランスポゾン挿入近傍のゲノムDNAをインバースPCR法によりクローニングし、塩基配列を決定し、トランスポゾンがhoxcクラスターに挿入されていることを明らかにした。5'RACE法によりhoxc3a遺伝子の転写がトラップされていることを明らかにした。(4)この他に単一のトランスポゾン挿入を有する遺伝子トラップゼブラフィッシュを15系統確立し、インバースPCRによる近傍ゲノムの解析を行った。また、これらのうち7系統について5'RACE法によりトラップされている転写物を明らかにした。

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专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

Kawakami, K., Noda, T.: "Transposition of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish Oryzias latipes, in mouse embryonic stem cells."Genetics. 166. 895-899 (2004)

Kawakami, K., Noda, T.：“Tol2 元件（一种来自日本青鳉鱼 Oryzias latipes 的 Ac 样元件）在小鼠胚胎干细胞中的转位。”遗传学。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

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