ゼブラフィッシュの挿入変異生成法による脊椎動物遺伝子の機能解析

使用斑马鱼插入诱变方法进行脊椎动物基因的功能分析

• 批准号: 15011256
• 负责人: 川上 浩一
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011256/
• 关键词: 分子生物学; 発生遺伝学; ゼブラフィッシュ; トランスポゾン; 挿入変異; 転移酵素; 遺伝子トラップ; トランスジェニック動物

(1)メダカトランスポゾンTol2因子を基に、スプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子、SV40のポリAシグナルをも遺伝子トラップベクターを構築した。転移酵素をコードするmRNAを試験管内で合成した。この遺伝子トラップベクタープラスミドDNAを転移酵素mRNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入した。(2)微量注入を施されたゼブラフィッシュを成魚に育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュ胚を得た。それら次世代ゼブラフィッシュ胚を実体蛍光顕微鏡下で観察することにより、GFPを時空間特異的に発現する遺伝子トラップゼブラフィッシュを多数分離することができた。(3)遺伝子トラップゼブラフィッシュのうちの1つでは、GFPが体節特異的に発現していた。この遺伝子トラップゼブラフィッシュをかけあわせることにより、単一のトランスポゾン挿入を有するゼブラフィッシュ系統を確立した。サザン解析により、体節特異的発現の原因となるトランスポゾン挿入を特定することができた。トランスポゾン挿入近傍のゲノムDNAをインバースPCR法によりクローニングし、塩基配列を決定し、トランスポゾンがhoxcクラスターに挿入されていることを明らかにした。5'RACE法によりhoxc3a遺伝子の転写がトラップされていることを明らかにした。(4)この他に単一のトランスポゾン挿入を有する遺伝子トラップゼブラフィッシュを15系統確立し、インバースPCRによる近傍ゲノムの解析を行った。また、これらのうち7系統について5'RACE法によりトラップされている転写物を明らかにした。

(1)The base, the site, the vector, the GFP vector, the SV40 vector, and the Tol2 vector are constructed. The mRNA of the enzyme was synthesized in the tube. The gene expression of DNA was determined by microinjection of DNA into the fertilized egg. (2)A small amount of water was injected into the fish. The next generation of GFP was observed under a microscope. (3)GFP-specific gene expression is observed in the first part of this study. The system was established in 1998. Analysis of the causes of segment-specific occurrence and identification of segment-specific occurrences The PCR method for determining the nucleotide sequence and nucleotide sequence of the DNA sequence is described in detail below. 5'RACE method: hoxc3a is the best way to improve the quality of a product. (4)This is the first time that we've had a chance to get involved in a DNA sequence. We've had a chance to get involved in a DNA sequence. 7 system, 5 'RACE method, 5' RACE method, 5 'RACE method, 5

项目成果

Kawakami, K., Noda, T.: "Transposition of the Tol2 element, an Ac-like element from the Japanese medaka fish Oryzias latipes, in mouse embryonic stem cells."Genetics. 166. 895-899 (2004)

Kawakami, K., Noda, T.：“Tol2 元件（一种来自日本青鳉鱼 Oryzias latipes 的 Ac 样元件）在小鼠胚胎干细胞中的转位。”遗传学。

ClarK, M.S., Edwards, Y.J.K., Peterson, D., Clifton, S.W., Thompson, A.J., Sasaki, M., Suzuki, Y., Kikuchi, K., Watabe, S., Kawakami, K., Sugano.S., Elgar, G., Johnson, S.L.: "Fugu ESTs : New resources for transcription analysis and genome annotation."Gen

克拉克，M.S.，爱德华兹，Y.J.K.，彼得森，D.，克利夫顿，S.W.，汤普森，A.J.，佐佐木，M.，铃木，Y.，菊池，K.，渡边，S.，川上，K.，菅野.S.

Terai, Y., Morikawa, N., Kawakami, K., Okada, N.: "The complexity of alternative splicing of hagoromo mRNAs is increased in an explosively speciated lineage in East African cichlids."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 100. 12798-12803 (2003)

Terai, Y.、Morikawa, N.、Kawakami, K.、Okada, N.：“在东非丽鱼科鱼的爆炸性物种谱系中，hagoromo mRNA 选择性剪接的复杂性增加。”Proc.Natl.Acad.Sci。