ゼブラフィッシュの挿入変異生成法による脊椎動物遺伝子の機能解析

使用斑马鱼插入诱变方法进行脊椎动物基因的功能分析

• 批准号: 14011207
• 负责人: 川上 浩一
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011207/
• 关键词: 分子生物学; 発生遺伝学; ゼブラフィッシュ; トランスポゾン; 挿入変異; 初期発生; 遺伝子トラップ; トランスジェニック動物

本研究では、メダカゲノムから同定されたトランスポゾンTol2因子を用いて、モデル脊椎動物である小型魚類ゼブラフィッシュにおける効率のよい挿入変異生成法、遺伝子導入法の開発を目的として研究を行い、以下の成果を得た。また、ゼブラフィッシュレトロウィルス挿入変異hagoromoの原因遺伝子に関する解析を行い、以下の成果を得た。(1)To12因子にゼブラフィッシュSix3.2遺伝子のプロモーターとGFP遺伝子を組み込んだ。このプラスミドDNAを転移酵素をコードするmRNAとともにゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入し、次世代においてトランスジェニックフィッシュを同定することに成功した。このトランスジェニックゼブラフィッシュにおいては、前脳、目でGFPを特異的に発現てていた。(2)Tol2因子を基に、スプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子、SV40のポリAシグナルをもつ遺伝子トラップベクターを構築した。このトラップベクタープラスミドDNAを転移酵素をコードするmRNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入した。これらゼブラフィッシュを成魚に育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュを得た。それら次世代ゼブラフィッシュを解析することにより、遺伝子トラップ法の実施が可能であることを示した。(3)ゼブラフィッシュhagoromo遺伝子のhomologを東アフリカのカワスズメからクローニングし、カワスズメの種分化にhagoromo遺伝子の進化が関与する可能性を示唆した。

This study is aimed at the development of a method of genetic transformation and gene introduction for the use of the Tol2 factor in vertebrate fish. The following results are obtained. The following results were obtained from the analysis of the causes of different hagoromo (1)To12 factor The gene expression of DNA was determined by microinjection of DNA into the oocyte. This is a special development of GFP. (2)Tol2 factor gene base, gene position, gene expression, GFP gene, SV40 gene expression, gene expression, The DNA transfer enzyme was microinjected into the fertilized egg. This is the first time I've ever seen a child. The next generation is the first generation to be analyzed and implemented. (3)The homolog of hagoromo gene is related to the possibility of evolution of hagoromo gene.

项目成果

Terai, Y., Morikawa, N., Kawakami, K., Okada, N.: "Accelerated evolution of the surface amino acids in the WD-repeat domain encoded by the hagoromo gene in an explosively speciated lineage of east African cichlid fishes"Molecular Biology and Evolution. 19

Terai, Y.、Morikawa, N.、Kawakami, K.、Okada, N.：“在东非丽鱼科鱼的爆炸性物种谱系中，由 hagoromo 基因编码的 WD 重复结构域中表面氨基酸的加速进化”