ゼブラフィッシュにおけるトランスポゾンテクノロジーの開発

斑马鱼转座子技术的进展

• 批准号: 13878139
• 负责人: 川上 浩一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: National Institute of Genetics (2002)The University of Tokyo (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13878139/
• 关键词: 分子生物学; 発生遺伝学; ゼブラフィッシュ; トランスポゾン; 挿入変異; 初期発生; 遺伝子トラップ; トランスジェニック動物; メダカ; 遺伝子導入; マウス; トランスジェニック; GFP

本研究では、メダカゲノムから同定されたトランスポゾンTol2因子を用いて、モデル脊椎動物である小型魚類ゼブラフィッシュにおける新しい挿入変異生成法、遺伝子導入法の開発研究を行い、以下の成果を得た。(1)Tol2因子をもつプラスミドDNAを転移酵素をコードするmRNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入した。これらゼブラフィッシュを成魚に育て、かけあわせにより次世代でトランスジェニックフィッシュを得た。これにより、Tol2因子を効率よくゼブラフィッシュ生殖細胞ゲノムへ転移させる方法の開発に成功した。(2)Tol2因子にゼブラフィッシュSix3.2遺伝子のプロモーターとGFP遺伝子を組み込んだ。このプラスミドDNAを転移酵素をコードするmRNAとともにゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入し、次世代においてトランスジェニックフィッシュを同定することに成功した。このトランスジェニックゼブラフィッシュは、前脳、目でGFPを特異的に発現していた。(3)Tol2因子を基に、スプライスアクセプター部位、リポーター遺伝子であるGFP遺伝子、SV40のポリAシグナルをもつ遺伝子トラップベクターを構築した。このトラップベクタープラスミドDNAを転移酵素をコードするmRNAとともに、ゼブラフィッシュ受精卵へ微量注入した。これらゼブラフィッシュを成魚に育て、かけあわせにより次世代のゼブラフィッシュを得た。それら次世代ゼブラフィッシュを解析することにより、遺伝子トラップ法の実施が可能であることを示した。

This study で は, メ ダ カ ゲ ノ ム か ら with fixed さ れ た ト ラ ン ス ポ ゾ ン Tol2 factor を with い て, モ デ ル vertebrate で あ る small fish ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ に お け る new し い scions into - different generation, but son 伝 import の open を い, the following の 発 research を た. (1) Tol2 factor を も つ プ ラ ス ミ ド DNA を planning shift enzyme を コ ー ド す る mRNA と と も に, ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ fertilized egg へ trace injection し た. Youdaoplaceholder5 れらゼブラフィッシュを adult fish に raise て, けあわせによ れらゼブラフィッシュを next generation でトラ スジェニッ スジェニッ フィッシュを フィッシュを フィッシュを フィッシュを た た. <s:1> れによ, Tol2 factor を efficacy よくゼブラフィッシュ germ cell ゲノムへ転 transfer させる method <s:1> development に success た た. (2) The Tol2 factor にゼブラフィッシュSix3.2 will have 伝 subunits <s:1> プロモ タ と とGFP will have 伝 subunits を group み込んだ. こ の プ ラ ス ミ ド DNA を planning shift enzyme を コ ー ド す る mRNA と と も に ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ fertilized egg へ trace injection し, next generation に お い て ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク フ ィ ッ シ ュ を with fixed す る こ と に successful し た. こ の ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ は, former 脳, mesh で GFP を specific に 発 now し て い た. (3) Tol2 factor を に, ス プ ラ イ ス ア ク セ プ タ ー parts and リ ポ ー タ ー heritage 伝 son で あ る GFP heritage 伝, SV40 の ポ リ A シ グ ナ ル を も つ heritage 伝 son ト ラ ッ プ ベ ク タ ー を build し た. こ の ト ラ ッ プ ベ ク タ ー プ ラ ス ミ ド DNA を planning shift enzyme を コ ー ド す る mRNA と と も に, ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ fertilized egg へ trace injection し た. Youdaoplaceholder5 れらゼブラフィッシュを adult fish に raise て, けあわせによ the next generation ゼブラフィッシュを ゼブラフィッシュを た. そ れ ら nextgen ゼ ブ ラ フ ィ ッ シ ュ を parsing す る こ と に よ り, but 伝 ト ラ ッ の プ method may be giving が で あ る こ と を shown し た.

项目成果

井上浩一: "ゼブラフィッシュの挿入変異生成法と脊椎動物の遺伝子機能研究"蛋白質核酸酵素. 46. 2456-2460 (2001)

Koichi Inoue：“斑马鱼插入诱变方法和脊椎动物基因功能研究”蛋白质核酸酶46。2456-2460（2001）。

Maruyama, S.: "Characterization of a mouse gene (Fbxw6) that encodes a homologue of Caenorhabditis elegans SEL-10"Genomics. 78. 214-222 (2001)

Maruyama, S.：“编码秀丽隐杆线虫 SEL-10 同源物的小鼠基因 (Fbxw6) 的表征”基因组学。

Terai, Y., Morikawa, N., Kawakami, K., Okada, N.: "Accelerated evolution of the surface amino acids in the WD-repeat domain encoded by the hagoromo gene in an explosively speciated lineage of east African cichlid fishes"Molecular Biology and Evolution. 19

Terai, Y.、Morikawa, N.、Kawakami, K.、Okada, N.：“在东非丽鱼科鱼的爆炸性物种谱系中，由 hagoromo 基因编码的 WD 重复结构域中表面氨基酸的加速进化”