小麦胚芽抽出物中に含まれるプロリン脱水素酵素の選択的阻害剤の開発

小麦胚芽提取物中脯氨酸脱氢酶选择性抑制剂的研制

• 批准号: 16048222
• 负责人: 森田 勇人
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048222/
• 关键词: 小麦胚芽; 無細胞蛋白質合成系; プロリン脱水素酵素; 阻害剤; アミノ酸選択的標識; NMR; ^1H-^<15>N HSQC

ハイスループットなタンパク質の構造機能相関の解明を行うにあたり、均質なタンパク質の大量調整法の確立は必要不可欠である。これまでに我々は、小麦胚芽抽出物を用いた無細胞タンパク質合成系を利用することで、生理活性を保持したタンパク質大量発現系を確立するとともに、アミノ酸選択的安定同位体標識技術を、プロリン以外の19種類のアミノ酸に対して確立した。一方、多くの植物では、プロリンとグルタミン酸との間で相互変換を行う系が存在することが知られている。これらの系の存在から我々は、^1H-^<15>N HSQCスペクトルの帰属に基づくタンパク質主鎖の構造情報解析には殆ど影響しないが、^<13>C標識を行うことによる側鎖の構造情報解析においては無視できない影響を与えると予測し、相互変換の系を効率的にブロックする手法開発を行った。プロリンからグルタミン酸への変換において作用するプロリン脱水素酵素活性を阻害するために、親水性置換基による溶解度向上が図られたヒドロキシキノリン誘導体を用い、タンパク質合成能を阻害しない濃度域における阻害能を評価した。一方、グルタミン酸のプロリンへの変換において作用する2種の酵素のうちP5CRはMg^<2+>等の2価イオン濃度が高いと活性阻害を受けるが、高いマグネシウムイオン濃度下ではタンパク質合成が阻害されるため、もう1つの酵素であるP5CSのオルニチンによる阻害(0.37mM at 50% inhibition)の有効性を評価した。いずれの経路についても、^<13>C,^<15>N二重標識プロリンならびにプロリン以外の^<15>N単独標識アミノ酸によるHNCOスペクトル測定により評価を行った。さらに、小麦の種類による差異、小麦胚芽を抽出する際の有機溶媒処理の条件による相違、についても検討を行い、これらの検討結果を総合することでプロリンとグルタミン酸の側鎖における選択的標識化技術を完成した。

It is necessary to establish a mass adjustment method for the structure and function of homogeneous materials. The use of cell-free protein synthesis systems for wheat germ extracts, the establishment of a protein production system that maintains physiological activity, and the use of stable isotope identification techniques for acid selection, as well as the establishment of 19 acid pairs for wheat germ extracts, are described in detail below. One side, many kinds of plants, such as rice, rice, The <15>existence of this system is related to the analysis of the structural information of the main lock of the main lock of the main <13>lock The solubility of the hydrophilic substitution group is higher than that of the acid substitution group. The activity of P5CS was inhibited at high and medium concentrations of two enzymes, P5CR Mg^&lt;2+&gt;, and P5CS inhibition (0.37mM at 50% inhibition) was evaluated at high and medium concentrations of two enzymes. In the middle of the circuit<13>, <15>the <15>HNCO is selected from the group consisting of three elements: In addition, the identification technology of wheat varieties, organic solvent treatment conditions during wheat germ extraction, and the combination of test results were completed.

项目成果

Nature of the chemical bond formed with the structural metal ion at the A9/G10.1 motif derived from hammerhead ribozymes.

与源自锤头核酶的 A9/G10.1 基序上的结构金属离子形成的化学键的性质。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Am.Chem.Soc. 126
• 作者: Y.Tanaka;T.Kasai;S.Mochizuki;A.Wakisaka;E.H.Morita;C.Kojima;A.Toyozawa;Y.Kondo;M.Taki
• 通讯作者: M.Taki

Characterizatio of RNA-binding properties of three types of Rbp proteins in Anabaena sp.PCC7120.

鱼腥藻 PCC7120 中三种 Rbp 蛋白的 RNA 结合特性的表征。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Cell.Mol.Biol. 50
• 作者: T.Hamano;S.Murakami;K.Takayama;S.Ehira;K.Maruyama;H.Kawakami;E.H.Morita;H.Hayashi;N.Sato
• 通讯作者: N.Sato

Identification and characterization of NuhA, a novel Nudix hyrolase specific for ADP-ribose in the cyanobacterium Synechococcus sp.PCC7002.

NuhA 的鉴定和表征，NuhA 是一种新型 Nudix 水解酶，对蓝藻聚球藻 sp.PCC7002 中的 ADP-核糖具有特异性。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochim.Biophys.Acta 1699
• 作者: K.Okuda;Y.Nishiyama;E.H.Morita;H.Hayashi
• 通讯作者: H.Hayashi

A novel way of amino acid-specific assignment in 1H-15N HSQC spectra with a wheat germ cell-free protein synthesis system

• DOI: 10.1023/b:jnmr.0000042956.65678.b8
• 发表时间: 2004-09-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOMOLECULAR NMR
• 影响因子: 2.7
• 作者: Morita, EH;Shimizu, M;Kohno, T
• 通讯作者: Kohno, T

Domain structures and characterization of an RNA binding proteins TLS/FUS.

RNA 结合蛋白 TLS/FUS 的结构域结构和表征。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biol.Chem. 279
• 作者: Y.Iko;T.S.Kodama;N.Kasai;T.Oyama;E.H.Morita;T.Muto;M.Okumura;R.Fujii;T.Takumi;S.Tate;K.Morikawa
• 通讯作者: K.Morikawa