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ファージライブラリーを基軸にした膜インターフェイス制御分子の設計と合成

基于噬菌体库的膜界面控制分子的设计与合成

基本信息

批准号：
16048228
负责人：
藤井郁雄
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048228/
关键词：
ペプチドライブラリー α-ヘリックスファージ G-CSF CDスペクトル

项目摘要

de novoペプチドライブラリーの構築α-ヘリックス構造は酵素やレセプターのターゲットモチーフとして数多く報告されている.私たちはヘリックス・ループ・ヘリックス構造を完全de novoデザインし、この溶媒面に位置する残基をランダム化したα-ヘリカルペプチド・ライブラリーをファージ上に構築した.土台としたヘリックス・ループ・ヘリックスペプチドは2本のヘリックス(N-ヘリックス,C-ヘリックス)の内側に位置するロイシン残基の疎水性相互作用とN-ヘリックスの側面のグルタミン酸残基とC-ヘリックスの側面のリジン残基の静電相互作用によって安定化されている.そこでN-ヘリックスを構造支持領域とし、C-ヘリックスの溶媒面の残基をランダム化することで3次構造を保持したライブラリーを作製した.このペプチドライブラリーをM13ファージのp8蛋白上に発現させファージ・ライブラリーを構築した(ライブラリーサイズ:1.5×10^6).G-CSF受容体結合性ペプチドのスクリーニング上記ライブラリーをG-CSF受容体に対してスクリーニングした,受容体膜外ドメインのサイトカイン結合領域をプレート上に固定化し,バイオパンニングを繰り返したところ,受容体に特異的に結合するペプチドを同定した.ペプチドの構造活性相関このペプチドの立体構造と結合活性の関係を調べるために,CDスペクトルを解析したところ10%TFE(Trifluoro ethanol)存在下,α-ヘリックス構造を形成していた.そこで,水溶液中でのヘリックスの安定化を図り,変異体を作製した.その結果,ヘリックスの安定化にともない受容体結合活性が向上することが判明した.

The structure of de novo selection and selection is α-selection and selection. The structure of de novo selection and selection is α-selection and selection. The structure is completely novel, and the solvent surface is located in the residue structure. Hydrostatic interaction of residues at the inner position of the 2-terminal (N-terminal, C-terminal) and electrostatic interaction of acid residues at the bottom of N-terminal and C-terminal. The structure of the N-type support domain is controlled by the residue of the C-type support domain. This selection process was developed on the p8 protein of M13 and constructed (1.5×10^6).G-CSF receptor binding activity was recorded on the G-CSF receptor, and the receptor membrane binding domain was immobilized. In the presence of 10% TFE (Trifluoro ethanol),α-trifluro-structure was formed. In aqueous solution, the solution is stabilized, and the mixture is prepared. As a result, it was found that the receptor binding activity was increased after stabilization.

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Phage-display selection of antibodies to the left end of CTX3Cusing synthetic fragments

使用合成片段对 CTX3C 左端抗体进行噬菌体展示选择

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Journal of Immunological Methods 289
影响因子：
0
作者：
Ikuo Fujii;Akiko Matsui;Takashi Kodama;Takeshi Tsumuraya;Mitsumori Kirihata;Yin Lin;Yin Lin;Yoko Nagumo
通讯作者：
Yoko Nagumo

Isolation of novel catalytic antibody clones from combinatorial library displayed on yeast-cell surface

从酵母细胞表面展示的组合文库中分离新型催化抗体克隆