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ファージ・ライブラリーを利用した膜インターフェイス製御分子の最適化と機能

使用噬菌体库的膜界面控制分子的优化和功能

基本信息

批准号：
17048026
负责人：
藤井郁雄
金额：
$ 4.29万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,強固な立体構造をもつペプチドから構成される独自のファージ表層提示ペプヂド・ライブラリーを構築し,このライブラリーを用いて膜インターフェイスにおけるタンパク質-タンパク質相互作用を制御するリガンド分子(促進的あるいは制御劇リガンド)の新しい設計技術を開発する.これまでに,顆粒球刺激因子(G-CSF)受容体結合ペプチドの獲得に成功した.本年度は,この設計技術をインターロイキン-5(IL-5)受容体に適用し,制御リガンドを獲得した.(1)IL-5受容体親和性ペプチドの獲得:既に作成済みのファージ表層提示α-ヘリックスペプチドライブラリーをIL-5受容体を固定化したプラスチックを使ってスクリーニングし,IL-5受容体結合性のファージを獲得した.(2)受容体結合性ペプチドの合成:得られたファージ粒子についてファージELISAを行い,強く結合するクローンを得た.その中から,高い結合性を示した4種のベプチドを固相合成した.(3)ペプチドの受容体結合試験:4種のペプチドについて円二色性スペクトル(CD)により,ヘリックス構造の安定性を調べた.また,SPRによりペプチドと受容体との結合を検討したところ,IL5-R10-23が最も高い結合を示した(K_d=302μM).(4)受容体結合性ペプチドのアラニンスキャニング:受容体結合ペプチドIL5-R10-23のC-末端ヘリックスのランダム化したアミノ酸についてアラニンスキャニングを行い,各アミノ酸の結合および構造の維持における必要性を検討した.その結果,K24およびL24をアラニンに変換した変異体はいずれも結合活1生が,向上した(それぞれKd=49,47μM).ヘリックス安定性はIL5-R10-23とほとんど変わらなかった.

In this study, we developed a new design technique for controlling the interaction between solid and solid structures, and for controlling the interaction between solid and solid structures. Therefore, granulocyte stimulating factor (G-CSF) receptor binding was successfully obtained. This year, the design technology of the new design technology was applied to the IL-5 receiver, and the control technology was obtained. (1) The affinity of IL-5 receptor was obtained by immobilizing the IL-5 receptor, and the affinity of IL-5 receptor was obtained by immobilizing the IL-5 receptor. (2)Receptor-binding selection and synthesis: the ability to bind strongly to the target particle by ELISA. 4 kinds of solid-phase synthesis were demonstrated. (3)Selection of receptor binding test:4 kinds of selection of receptor binding test: 4 kinds of selection of receptor binding test (CD). The highest binding of IL5-R10-23 was found at K_d=302μM. (4)Receptor-binding selection: Receptor-binding selection of IL5-R10-23 C-terminal selection of IL5-R10-23 C-terminal selection of IL5-R10- 23. As a result,K24 and L24 were found to be in the middle of the spectrum, and Kd=49,47μM. The IL5-R10-23 is a stable and stable structure.