レジオネラ菌無作為遺伝子変異法を用いた樹状細胞活性化抑制機構の解明

利用军团菌随机基因突变法阐明树突状细胞活化抑制机制

• 批准号: 17019002
• 负责人: 菊地 利明
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17019002/
• 关键词: 遺伝子; トランスレーショナル リサーチ; バイオテクノロジー; 免疫学

レジオネラ菌は細胞内寄生性を特徴とするグラム陰性桿菌で、肺炎起炎菌としてしばしば臨床的問題となっている。われわれが免疫機構において最も重要な抗原提示細胞である樹状細胞を取り上げ、レジオネラ菌に対する樹状細胞の免疫応答を調べたところ、レジオネラ菌の生菌と死菌では、これを取り込んだ樹状細胞の引き起こす免疫応答は全く異なり、死菌によって樹状細胞は活性化され、感染宿主内で感染防御的な免疫応答を惹起するものの、生菌では樹状細胞の活性化は逆に阻害されることが明らかとなった(J.Immunol.172:1727-1734,2004)。そこで当該研究課題は、レジオネラ菌による樹状細胞活性化の抑制作用に着目し、レジオネラ菌の無作為遺伝子変異株を作製することによって、この分子機構の解明を目指すものである。まずレジオネラ菌の無作為遺伝子変異株を作製する目的で、Tn903由来のプラスミドとmini-Tn10由来のプラスミドをそれぞれ入手し、レジオネラ菌のコンピーテント細胞にそれぞれエレクトロポレーション法で遺伝子導入した。いずれのプラスミドを導入しても多数の変異株が得られた。そこで、トランスポゾンTn903のゲノム挿入は無作為ではないことが懸念されたため、トランスポゾンmini-Tn10由来のプラスミドを用いて作製した遺伝子変異株から、樹状細胞の活性化能を指標にスクリーニングを行った。1344個のレジオネラ菌遺伝子変異株をそれぞれ樹状細胞と48時間共培養し、その培養上清中のIL-12量をELISA法で測定した。その結果、樹状細胞からのIL-12産生量が多い変異株、すなわち、樹状細胞の活性化阻害作用を失ったレジオネラ菌遺伝子変異株を最終的に計10株選択した。そして、これらレジオネラ菌遺伝子変異株10株は、共培養した樹状細胞のCD54発現を上昇させ、樹状細胞活性化抑制能を喪失した真の陽性株であることを確認した。

The characteristics of intracellular parasitism of bacteria are negative, inflammatory bacteria and clinical problems. Dendritic cells are the most important antigen indicator cells in the immune system. Dendritic cells are selected from the host cells, and the immune response of dendritic cells is regulated by the host cells. Dendritic cells are selected from the host cells. Dendritic cells are activated by the host cells. Dendritic cells are activated by the host cells. Dendritic cells are used to protect against infection. The activity of dendritic cells in bacteria is inhibited by the reverse reaction (J. Immunol. 172:1727- 1734, 2004). This study aims to investigate the inhibition of dendritic cell activation in bacteria, the control of non-reactive mutant strains of bacteria, and the elucidation of molecular mechanisms. For the purpose of production of non-mutant strains of recombinant strains, Tn903-derived strains and mini-Tn10-derived strains are introduced into the cells of recombinant strains using a variety of methods. Most of the plants in the middle of the forest were planted. The activity index of Tree-like cells is determined by the activity index of Tree-like cells. The activity index of Tree-like cells is determined by the activity index of Tree-like cells. The IL-12 content in the supernatant of 1344 strains of recombinant DNA was measured by ELISA after 48 hours of co-culture. As a result, a total of 10 strains were selected from among the various strains that produced IL-12 from dendritic cells and lost their active inhibitory effect on dendritic cells. The expression of CD54 in dendritic cells was increased in 10 strains, and the inhibition of dendritic cell activity was lost in 10 strains.

项目成果

Antitumor immune response by CX3CL1 fractalkine gene transfer depends on both NK and T cells

• DOI: 10.1002/eji.200526042
• 发表时间: 2005-05
• 期刊: European Journal of Immunology
• 影响因子: 5.4
• 作者: H. Xin;T. Kikuchi;S. Andarini;S. Ohkouchi;Takuji Suzuki;T. Nukiwa;Huqun;K. Hagiwara;T. Honjo;Y. Saijo

Overexpression of the Runx3 transcription factor increases the proportion of mature thymocytes of the CD8 single-positive lineage

• DOI: 10.4049/jimmunol.174.5.2627
• 发表时间: 2005-03-01
• 期刊: JOURNAL OF IMMUNOLOGY
• 影响因子: 4.4
• 作者: Kohu, K;Sato, T;Satake, M
• 通讯作者: Satake, M

Vaccination of dendritic cells loaded with interleukin-12-secreting cancer cells augments in vivo antitumor immunity: characteristics of syngeneic and allogeneic antigen-presenting cell cancer hybrid cells.

• 发表时间: 2005
• 期刊: Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research
• 作者: Takuji Suzuki;T. Fukuhara;Masashi Tanaka;A. Nakamura;Kenichi Akiyama;Tomohiro Sakakibara;D. Koinuma;T. Kikuchi;R. Tazawa;M. Maemondo;K. Hagiwara;Y. Saijo;T. Nukiwa

Involvement of Fractalkine/CX3CL1 Expression by Dendritic Cells in the Enhancement of Host Immunity against Legionella pneumophila

• DOI: 10.1128/iai.73.9.5350-5357.2005
• 发表时间: 2005-09
• 期刊: Infection and Immunity
• 影响因子: 3.1
• 作者: T. Kikuchi;S. Andarini;H. Xin;K. Gomi;Y. Tokue;Y. Saijo;T. Honjo;A. Watanabe;T. Nukiwa

Dendritic cells modified to express fractalkine/CX3CL1 in the treatment of preexisting tumors

• DOI: 10.1002/eji.200535549
• 发表时间: 2006-04
• 期刊: European Journal of Immunology
• 影响因子: 5.4
• 作者: M. Nukiwa;S. Andarini;J. Zaini;H. Xin;M. Kanehira;Takuji Suzuki;T. Fukuhara;H. Mizuguchi;T. Hayakawa