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中枢神経細胞で高発現するレトロトランスポゾンLINE1の神経細胞での機能解明

阐明在中枢神经细胞中高表达的逆转录转座子 LINE1 在神经细胞中的功能

基本信息

批准号：
17024037
负责人：
杉野英彦
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

L1(LINE-1)は、哺乳類ゲノムの30%を占める分散型反復配列である。生殖細胞での、転写・逆転写・再挿入(レトロトランスポジション)により、そのコピー数を増やしてきた。そのほとんどのものがすでに機能を失い、ごく少数のものだけがレトロトランスポジション可能であるとされている。そのため、L1はパラサイトなものであり、体細胞における機能に関しては議論されてこなかった。そこで我々は、L1の脳神経細胞での機能解明に着手した。本年度は、L1の脳神経細胞での詳細な発現を検討し、下記条項を明らかにした。1,L1が高頻度に発現している組織の検討脳4領域(嗅球、海馬、大脳皮質、小脳)、心臓、肺、腎臓、肝臓等、においてL1の発現をRT-PCR、ノーザンブロットで調べたところ脳4領域における強い発現を見出した。2,L1のサブタイプの同定上記RT-PCRで得られたPCR産物60個をクローニングしシークエンス解析した結果、34個がTf型、13個がA型であった。それらのほぼ全てが(合計47個中45個)ORFを保持していることを明らかにした。3,L1の脳での発現頻度脳組織由来のcDNAライブラリーを構築し、スクリーニングを行った結果、脳組織での全転写産物の2000個に1個がL1であった。さらにランダムに選んだ12クローン中、10クローンが全長鎖であり、その半分にあたる5クローンが完全なORFを保持するTf型であることを明らかにした。4,L1の脳での詳細な発現領域の検討In-situハイブリダイゼーションの結果、成体マウス脳では嗅球全領域、大脳皮質2〜3層、海馬(CA1〜3,DG)、小脳顆粒細胞での強い発現を見出した。また胎生13週の脳形成時ではCortex, Ganglionic eminence, Mid braih, Hind brain, Neural tubeでの強い発現を見出すことができた。

L1(LINE-1): Mammals: 30% of the time. The number of germ cells in the reproductive system has increased. A few of the features of the device are missing, and the device may be missing. The function of cell is discussed. The function of L1 neurons is explained. This year, L1's neurons are detailed in the following paragraphs: 1,L1 was detected with high frequency in 4 areas (olfactory bulb, hippocampus, large cortex, small intestine), heart, lung, kidney, liver, etc. 2. 60 PCR products were detected by RT-PCR, 34 were Tf type and 13 were A type. The ORFs of all 45 out of 47 were kept open. 3. The frequency of L1's discovery is the result of the construction of the cDNA library from which the organization originated, the implementation of the library design, and the completion of the organization's 2000 full-written products. For example, if you want to select a 12-minute, 10-minute, full-length lock, 5-minute, full-length ORF, or Tf-type lock, you can select a 12-minute, 10-minute, full-length, or half-length lock. 4. The results of detailed investigation on the development field of L1 cells showed that the whole field of olfactory bulb, layer 2 ~ 3 of large cortex, hippocampus (CA1 ~ 3,DG) and granular cells in adult were strongly developed. Cortex, Ganglionic eminence, Mid braih, Hind brain, Neural tube, and strong middle appearance appear when the fetus is born at the 13th week.