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酸化ストレスと小胞体-オルガネラ維持の分子機構

氧化应激和内质网细胞器维持的分子机制

基本信息

批准号：
17051006
负责人：
山田真紀
金额：
$ 3.84万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では植物の酸化ストレス応答機構として、小胞体タンパク質BI-1によるオルガネラの維持機構を明らかにすることを目的として研究をおこなった。植物は種々の環境ストレスに適応して生育しており、そのために細胞の生死を柔軟に制御する機構を有している。BI-1は酸化ストレス誘導性細胞死の抑制因子として単離された小胞体タンパク質である。本研究では、小胞体のストレス耐性因子BI-1の細胞死抑制機構をその相互作用因子を単離、解析することにより解明することを目指した。これまでにBI-1に相互作用する因子としてはカルモジュリンとチトクロムb5が単離されている。このうち、本年度はチトクロムb5とBI-1の相互作用について詳細な解析を行った。すなわち、本因子は酵母を用いたtwo-hybrid法により単離された因子であるが、これらの相互作用が実際に植物細胞内で起きているかを、BiFC法やFRETの手法を用いることにより証明した。BI-1タンパク質は膜局在性であるために可溶化が難しく、これまで抗体の作成や、タグを用いたタンパク質検出法による相互作用解析が困難であった。そこで、蛍光タンパク質を用いたバイオイメージング法による相互作用解析の手法を取り入れたものである。BiFC法により、全長のBI-1と小胞体局在性のチトクロムb5の可溶性領域が植物細胞(タバコ)でも相互作用することを明らかにした。また、さらにFRET法を用いることにより、全長のBI-1と全長のチトクロムb5が相互作用できることを明らかにした。

This study aims to investigate the mechanism of plant acidification, microcellular development and maintenance. The plant has a soft control mechanism for its growth and development. BI-1 is an inhibitor of intracellular apoptosis. This study aims to elucidate the interaction between cytostatic tolerance factor BI-1 and cytostatic mechanisms. The BI-1 interaction is caused by the separation of the BI-1 from the BI-1. This year, the interaction between B5 and BI-1 was analyzed in detail. The two-hybrid method is used to prove the interaction between yeast and cell. BI-1 is difficult to analyze the interaction between the two molecules. The method of interaction analysis is used to extract the information from the sample. BiFC method, full-length BI-1, soluble domain and plant cell interaction The FRET method is used in the interaction between BI-1 and BI-5.